Participación de epítopos de reconocimiento de linfocitos t de la proteína GP5 del virus PRRSV en la respuesta inmune innata porcina

Abstract

Swine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRSV) virus affects pigs causing high morbidity. The target cells of the virus are alveolar macrophages whose functions decrease during infection. We have previously identified epitopes (peptides) of T-cell recognition in the GP5 sheath protein, which induced mRNA expression of proinflammatory cytokines in mouse macrophages and stimulated polarization to the M1 phenotype. The mechanisms underlying the response of pig macrophages to viral peptides are unknown. Objective: To evaluate the participation of the NF-κB pathway in the activation of pig macrophages induced by the peptides derived from the GPGP5 protein of PRRSV, called GP5T1, GP5T2 and GPT3. Methodology: Western Blot, Reporters system and X-MAP/Luminex system were used. Results: A statistically significant increase in p-P65 expression was observed according to the following order GP5T2 ≥ GP5T1 ≥ TNFα ≥ LPS ≥GPT3 compared to the control, which suggests that the peptides GP5T1, GP5T2 and GPT3 activate the NF-kB pathway. On the other hand, it was observed that the three viral peptides were able to induce the transactivation of the cis element of NF-κB compared to the control, measured by the expression of the green fluorescent protein GFP. Also, a significant increase in IFN-γ, IL-1β, IL-10 and TNF-β secretion was observed with GP5T2 peptide treatment and an increase in IL-10 secretion after GP5T3 peptide treatment. Conclusion: The results suggest that peptides derived from the GP5 protein of PRRSV GP5T1, GP5T2 and GP5T3 are capable of inducing the activation of the NF-κB pathway in pig macrophages. Together, these data showed that the peptides GP5T1 GP5T2 and GP5T3 are sufficient to induce the phenotype M1/M2 in pig macrophages.

El virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRSV), afecta a cerdos provocando alta morbilidad. Las células blanco del virus son los macrófagos alveolares cuyas funciones disminuyen durante la infección. Previamente, hemos identificado epítopos (péptidos) de reconocimiento de linfocitos T en la proteína de envoltura GP5, los cuales indujeron la expresión de mRNA de citocinas proinflamatorias en macrófagos de ratón y estimularon la polarización al fenotipo M1. Se desconocen los mecanismos que subyacen en la respuesta de macrófagos de cerdo ante los péptidos virales. Objetivo: Evaluar la participación de la vía NF-κB en la activación de macrófagos de cerdo inducida por los péptidos derivados de la proteína GP5 del PRRSV, denominados GP5T1, GP5T2 y GPT3. Metodología: Se utilizó Western Blot, Sistema de reporteros y sistema X-MAP/Luminex. Resultados: Se observó un aumento estadísticamente significativo en la expresión de p-P65 de acuerdo con el siguiente orden GP5T2 ≥ GP5T1 ≥ TNFα ≥ LPS ≥ GPT3 comparados con el control, lo cual sugiere que los péptidos GP5T1, GP5T2 y GPT3 activan la vía NF-kB. Por otro lado, se observó que los tres péptidos virales fueron capaces de inducir la transactivación del elemento cis de NF-κB en comparación con el control, medido por la expresión de la proteína verde fluorescente GFP. También, se observó un aumento significativo en la secreción de IFN-γ, IL-1β, IL-10 y TNF-β con el tratamiento con el péptido GP5T2 y un aumento en la secreción de IL-10 después del tratamiento con el péptido GP5T3. Conclusión: Los resultados sugieren que los péptidos derivados de la proteína GP5 del PRRSV GP5T1, GP5T2 y GP5T3 son capaces de inducir la activación de la vía NF-κB en macrófagos de cerdo. En conjunto, estos datos mostraron que los péptidos GP5T1 GP5T2 y GP5T3 son suficientes para inducir el fenotipo M1/M2 en macrófagos de cerdo.