Producción de anticuerpos de gallina anti-proteína GP5 usando péptidos sintéticos y bibliotecas de CDNA de los anticuerpos (SCFV)

Abstract

Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (PRRS) is a disease caused by the PRRSV virus, this virus belongs to the arteriviridae family, with a single-stranded (+) mRNA genome of approximately 15 kb. This virus encodes five structural glycoproteins associated with the viral membrane (GP2, GP3, GP4, GP5 and GP5a). The PRRSV glycoprotein GP5 participates in the recognition of the virus and the target cell. Currently, three genotypes have been described: the European, the American and the highly pathogenic. PRRSV negatively affects the swine industry, causing millions in losses in each infectious episode. Data in the literature indicate that GP5 possesses epitopes that induce neutralizing antibodies (Abs), which can be used for diagnosis. To produce antibodies, anti-GP5 protein, three synthetic peptides derived from the GP5 protein (named GP51, GP52 and GP53) were purchased. Said peptides were inoculated independently in chickens. On the other hand, a second group of hens were immunized with the vaccine virus (PRRSVv). Chicken IgYs (immunoglobulins Y) were obtained from the egg yolk at 0, 15, 30 and 45 days post-immunization. An indirect ELISA test was carried out using a chicken anti-IgY. Results: the GP51, GP52 and PRRSVv peptides induced specific IgY's with a maximum titer of 1:2000. Conclusion: the chicken IgYs obtained after immunization with GP51, GP52 and GP53 peptides recognized the specific antigens, and even more so recognized PRRSVv and the wild type PRRS virus from Michoacán. With the anti-PRRSV IgYs obtained in this work, the immunodiagnosis (ELISA and Western blot) of PRRSV can be implemented.

El Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRS), es una enfermedad causada por el virus PRRSV, este virus pertenece a la familia arteriviridae, con genoma de mRNA (+) monocatenario de aproximadamente 15 kb. Este virus codifica cinco glicoproteínas estructurales asociadas a la membrana viral (GP2, GP3, GP4, GP5 y GP5a). La glicoproteína GP5 del PRRSV participa en el reconocimiento del virus y la célula blanco. Actualmente se han descrito tres genotipos: el europeo, el americano y el de alta patogenia. El PRRSV afecta de manera negativa la industria porcina, ocasionando pérdidas millonarias en cada episodio infeccioso. Datos en la literatura indican que GP5 posee epítopes que inducen anticuerpos (Abs) neutralizantes, que pueden ser usados para diagnóstico. Para producir anticuerpos, anti proteína GP5, se adquirieron tres péptidos sintéticos derivados de la proteína GP5 (denominados GP51, GP52 y GP53). Dichos péptidos fueron inoculados de manera independiente en gallinas. Por otro lado, un segundo grupo de gallinas fueron inmunizadas con el virus vacuna (PRRSVv). A partir de la yema de huevo, se obtuvieron las IgY’s (inmunoglobulinas Y) de gallina a los 0, 15, 30 y 45 días pos-inmunización. Se llevó a cabo una prueba de ELISA indirecta usando un anti-IgY de gallina. Resultados: los péptidos GP51, GP52 y el PRRSVv, indujeron IgY’s específicas con un título máximo de 1:2000. Conclusión: los IgY’s de gallina obtenidos después de la inmunización con péptidos GP51, GP52 y GP53, reconocieron a los antígenos específicos, más aún reconocieron al PRRSVv y al virus PRRS silvestre de Michoacán. Con las IgY’s anti-PRRSV obtenidas en este trabajo, se puede implementar el inmuno-diagnóstico (ELISA y Western blot) del PRRSV.