Efecto de la protoxina Cry 1Ac de Bacilus thuringiensis sobre el crecimiento hongos alergénicos

Abstract

Background: Allergic rhinitis is a major problem worldwide health, which mainly occurs in children and adolescents. Fungi are common causes of allergic sensitization. The search for new fungicides and immunomodulators of the immune response to fungi. It is an alternative to solve the growing problem of allergic rhinitis associated with fungi. Aim of the study: the effect of 1Ac Cry toxin Bacillus thuringiensis on the growth of fungi was studied allergens Material and methods: macroscopic and microscopic morphology of fungi isolated from nasal swabs of patients with allergic rhinitis was determined. Mononuclear cells were cultured by the method of selection 1.077 density gradient (Ficoll-Hypaque). RPMI 1640 medium and fetal bovine serum was used inactivated 10% for growth of monocytes., that were stimulated with different concentrations of Cry 1Ac, at 72 hours were obtained culture supernatants and subsequently used for performing fungigramas. fungigramas were performed with different concentrations and pure toxin. Results: The fungal strains were biotyped by Biolog team, identifying the following genera: Absidia sp, Aspergillus sp, Alternaria sp, Penicillium sp, Eupenicillium sp, Fusarium sp and Cladosporium sp. Macroscopic and microscopic identification was performed with blue dye Lactophenol finding a ratio of 100% with biotyped by Biolog team. In tests of sensitivity: supernatants (disks with 20μL) they showed no inhibition against strains of fungal allergens. Cry 1Ac pure toxin at different concentrations, and impregnated with 20 ul / disk inhibited fungal growth. Fungi that showed inhibition were Alternaria sp growth, to 31.25μg / mL, Absidia sp to 500μg / mL and 500μg Eupenicillium sp to / mL was 2mm diameter and consecutive in the three fungi and comparable to positive control Amphotericin B .

La rinitis alérgica es un problema de salud importante a nivel mundial, que principalmente se presenta en niños y adolescentes. Los hongos son causa frecuente de sensibilización alérgica. La búsqueda de nuevos funguicidas e inmunomoduladores de la respuesta inmune a hongos. Es una alternativa para dar solución al creciente problema de rinitis alérgica asociada a hongos. Objetivo del estudio: Se estudió el efecto de la toxina Cry 1Ac de Bacillus thuringiensis sobre el crecimiento de los hongos alergénicos Material y métodos: Se determinó la morfología macroscópica y microscópica de hongos aislados de exudados nasales de pacientes con rinitis alérgica. Se cultivaron células mononucleadas, mediante el método de selección por gradiente de densidad 1.077 (Ficoll-Hypaque). Se utilizó medio RPMI 1640 y suero fetal bovino inactivado al 10% para el crecimiento de los monocitos., que se estimularon con distintas concentraciones de Cry 1Ac, a las 72 horas se obtuvieron sobrenadantes de cultivos y posteriormente se utilizaron para la realización de fungigramas. Se realizaron fungigramas con toxina pura y a diferentes concentraciones. Resultados: Las cepas fúngicas se biotipificaron por equipo Biolog, identificando los siguientes géneros: Absidia sp, Aspergillus sp, Alternaria sp, Penicillium sp, Eupenicillium sp, Fusarium sp, y Cladosporium sp. Se realizó la identificación macroscópica y microscópica con tinción azul de lactofenol encontrando una relación del 100% con los biotipificados por equipo Biolog. En las pruebas de sensibilidad: los sobrenadantes (discos con 20μL) no presentaron inhibición frente a las cepas de hongos alergénicos. La toxina Cry 1Ac pura a diferentes concentraciones, e impregnado con 20 μL/disco, inhibió el crecimiento fúngico. Los hongos que presentaron inhibición de su crecimiento fueron Alternaria sp, a 31.25μg/mL, Absidia sp a 500μg/mL y Eupenicillium sp a 500μg/mL el diámetro fue de 2mm y consecutivo en los tres hongos y comparables con Anfotericina B como control positivo.