Caracterización de mutaciones en el gen Hairless de Drosophila melanogaster

Abstract

The Notch signaling pathway, highly conserved in metazoans, directed cell differentiation. The Hairless protein, its main antagonist characterized in Drosophila melanogaster, has no known homologues in vertebrates and has a low degree of conservation between Drosophilidae yet. However Hairless has structural regions are conserved and which presumably are essential to its operation. Some regions of Hairless gene mutant D. melanogaster lines X-ray generated were analyzed by the technique conformation polymorphism single chain (SSCP). Subsequently, regions with potential mutations were sequenced and analyzed with the DNASTAR software. aa its translation and the different predictions of secondary structure for the mutant proteins obtained in order to compare with the wild was obtained. Four changes were characterized in the same number of mutants. In the H133 mutant, a point mutation, C was located by T, within the sequence of the first intron in the 631 position, which apparently does not affect the protein structure. In the HW11 mutant, there was the elimination of 18bp in position 1429 to 1446, which eliminates 6 AA protein (position 222 to 227) in the binding domain Su (H) that could affect your interaction with this factor transcriptional. H3 mutant, showed a change of T by C (position 4648) that results in the substitution of S for P in the region C-terminal (position 1050) where the binding site co-repressor dCtBP, which you could also modify the interaction of H His (H). The H107 mutant, showed a change to G (position 3664), which results in the replacement of T by A (position 722), which generates an ? helix that does not exist in the wild protein, which could affect their interaction with other pathway proteins.

La vía de señalización Notch, altamente conservada en metazoarios, dirige la diferenciación celular. La proteína Hairless, su principal antagonista caracterizada en Drosophila melanogaster, no tiene homólogos conocidos en vertebrados y presenta un bajo grado de conservación aún entre Drosofílidos. Sin embargo Hairless tiene regiones estructurales que se conservan y que presumiblemente son indispensables para su funcionamiento. Algunas regiones del gen Hairless de líneas de D. melanogaster mutantes generadas con rayos X se analizaron mediante la técnica de polimorfismo en la conformación de cadenas sencillas (SSCP). Posteriormente, las regiones con posibles mutaciones se secuenciaron y se analizaron con el software DNAstar. Se obtuvo su correspondiente traducción a aa y las diferentes predicciones de la estructura secundaria para las proteínas mutantes obtenidas con el objeto de compararlas con la silvestre. Se caracterizaron cuatro cambios en igual número de mutantes. En la mutante H133, se localizó una mutación puntual, C por T, dentro de la secuencia del primer intrón, en la posición 631, que aparentemente no afecta la estructura de la proteína. En la mutante Hw11, hubo la eliminación de 18 pb, en posición 1429 a 1446, que elimina 6 aa de la proteína (posición 222 a 227) en el dominio de unión a Su(H) que podría repercutir en su interacción con este factor transcripcional. La mutante H3, presentó un cambio de T por C (posición 4648) que se traduce en la sustitución de S por P en la región C-terminal (posición 1050) donde se encuentra el sitio de unión al co-represor dCtBP, lo que también podría modificar la interacción de H con Su(H). La mutante H107, presentó un cambio de A por G (posición 3664), que se traduce en la sustitución de T por A (posición 722), que genera una hélice ? que no existe en la proteína silvestre, lo que podría afectar su interacción con otras proteínas de la vía.