Determinación de la actividad de la D-aminoácido oxidasa en mitocondrias de corazón de rata

Abstract

In the present study the presence of the FAD-dependent flavoprotein (flavin adenine dinucleotide) is observed, the "D-amino acid oxidase" (D-AAO) in rat heart mitochondria. the existence of this enzyme activity was demonstrated in the presence of D-Alanine (D-Ala), D-Serine (D-ser), D-methionine (D-Met) and D-aspartate (D-Asp), resulting D-AAO that has higher affinity for the D-Alanine (D-Ala) than by the other D-amino acids used. assays were performed using varying different parameters such as: • Time; activity was measured from 10 to 40 minutes. • Temperature; 30 and 37: the measurements with the four D-amino acids at 2 different temperatures are performed. • The concentration of D-amino acid (substrate); The following concentrations were used: 0.05 M, 0.075 M, 0.1 M and 0.2 M. • The pH; adjusting the reaction medium to acidic and basic pH and taking into account the measurements at physiological pH (7.0). The results suggest that the temperature of 30C and pH 7.0 are optimal requirements for D-AAO mitochondrial perform its function to oxidize D-amino acids.

En el presente estudio se observó la presencia de la flavoproteína dependiente de FAD (flavin adenin dinucleótido), la “D-amino ácido oxidasa” (D-AAO) en mitocondrias de corazón de rata. Se demostró la existencia de actividad de esta enzima, en presencia de D-Alanina (D-ala), D-Serina (D-ser), D-Metionina (D-met) y D-aspartato (D-Asp), resultando que la D-AAO tiene mayor afinidad por la D-Alanina (D-Ala) que por los otros D-aminoácidos usados. Se realizaron ensayos utilizando la variación de distintos parámetros como son: • El tiempo; la actividad se midió desde 10 hasta 40 minutos. • La temperatura; se realizaron las mediciones con los cuatro D-aminoácidos a 2 distintas temperaturas que son: 30 y 37ºC. • La concentración del D-aminoácido (sustrato); se usaron las siguientes concentraciones: 0.05 M, 0.075 M, 0.1 M y 0.2 M. • El pH; ajustando el medio de reacción a pH ácido y básico y tomando en cuenta las mediciones a pH fisiológico (7.0). Los resultados sugieren que la temperatura de 30ºC y el pH de 7.0 son los requerimientos óptimos para que la D-AAO mitocondrial lleve a cabo su función de oxidar a los D-aminoácidos.