Papel de aminoácidos con grupo R ácido en el funcionamiento de la proteína ChrA de Pseudomonas aeuriginosa

Abstract

CHRA is a membrane protein which confers chromate oxyanion in Pseudomonas aeruginosa, resistance across chromate expulsion outside the cell. CHRA has 13 transmembrane segments (STMs) joined six Cytoplasmic handles six periplasmic handles. This protein belongs to the superfamily of transporters CHR which consists of long-chain proteins (LCHR) and short-chain proteins (SCHR). Using site-directed mutagenesis have identified some neutral and basic residues essential for the operation of CHRA, to which were assigned a structural or functional role. The aim of this study was to determine the involvement of transmembrane acid residues Asp346 and 362, located in the STM XI, chromate resistance conferred by the CHRA protein of P. aeruginosa. Using site-directed mutagenesis acid residues by neutral amino acid alanine were changed. Asp346Ala and the Asp362Ala mutant, to which were assessed the level of resistance relative to the wild protein chromate susceptibility testing in nutrient broth at 37 ° C were obtained. The Asp346Ala and Asp362Ala mutants drastically affected the level of resistance to chromate, behaving similarly to the way sensitive control. This led to the conclusion that residues Asp346 and 362 are essential to the functioning of the CHRA protein, probably assisting in maintaining the correct structure.

ChrA es una proteína de membrana que confiere resistencia al oxianión cromato en Pseudomonas aeruginosa, a través de la expulsión de cromato al exterior celular. ChrA consta de 13 segmentos transmembranales (STMs) unidos por seis asas citoplásmicas y seis asas periplásmicas. Esta proteína pertenece a la superfamilia de transportadores CHR la cual consta de proteínas de cadena larga (LCHR) y proteínas de cadena corta (SCHR). Utilizando mutagénesis sitio dirigida se han identificado algunos residuos neutros y básicos esenciales para el funcionamiento de ChrA, a los cuales se les asignó un papel estructural o funcional. El objetivo de este trabajo fue determinar la participación de los residuos ácidos transmembranales Asp346 y 362, ubicados en el STM XI, en la resistencia a cromato conferido por la proteína ChrA de P. aeruginosa. Utilizando mutagénesis sitio dirigida se cambiaron los residuos ácidos por el aminoácido neutro alanina. Se obtuvieron las mutantes Asp346Ala y Asp362Ala, a las cuales se les evaluó el nivel de resistencia con respecto a la proteína silvestre en pruebas de susceptibilidad a cromato en caldo nutritivo a 37ºC. Las mutantes Asp346Ala y Asp362Ala afectaron drásticamente el nivel de resistencia a cromato, comportándose de manera similar al control sensible. Esto llevó a concluir que los residuos Asp346 y 362 son esenciales en el funcionamiento de la proteína ChrA, probablemente ayudando en mantener su correcta estructura.