Expresión y purificación de un fragmento conservado de la proteína robosomal S6 en plantas

Abstract

TOR (target of rapamycin) kinase protein is a highly conserved in eukaryotes, belonging to the family of phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K). TOR is involved in the regulation of cell growth through phosphorylation of downstream targets different in response to favorable conditions of nutrients and / or growth factors (Martin et al., 2005 Schmeizie et al, 2000.). The mechanism by which TOR regulates cell growth is through its effect on the translational machinery. (. Schmelzle et al, 2000) in optimal nutritional conditions, TOR not only promotes the production of new ribosomes, but also increases the speed of translation of existing ribosomes Two of the main targets of the TOR protein are: protein S6 kinase (S6K) and factor binding protein initiation of translation in eukaryotes, eIF4E (4EBP). S6K is a protein of approximately 70 kDa which phosphorylates several substrates being white S6 ribosomal best characterized protein subnidad lower ribosome (S6rp). Although not shown the presence of the protein in plants 4EBP, there is evidence of the signaling pathway involving the TOR in plant organisms (Levine et al., 2006). To characterize this route in recent organisms, it is necessary to have new tools, such as antibodies against proteins, which form part of the signaling pathway. Thus, the objective of this work is to express and purify a fragment conserved ribosomal S6 protein, in order to subsequently obtain polyclonal antibodies against this protein in plants using recombinant DNA technique.

La proteína TOR (blanco de rapamicina) es una cinasa altamente conservada en eucariontes, perteneciente a la familia de la fosfatidilinositol-3-cinasa (PI3K). TOR esta involucrada en la regulación del crecimiento celular a través de la fosforilación de diferentes blancos corriente abajo, en respuesta a condiciones favorables de nutrientes y/o factores de crecimiento (Martin y col., 2005; Schmeizie y col., 2000.). El mecanismo por el cual TOR regula el crecimiento celular es a través de su efecto sobre la maquinaria de traducción. En condiciones nutritivas optimas, TOR no solo promueve la producción de nuevos ribosomas, sino que también incrementa la velocidad de traducción de los ribosomas ya existentes (Schmelzle y col., 2000.) Dos de los principales blancos de la proteína TOR son: la proteína S6 cinasa (S6K) y la proteína de unión al factor del inicio de la traducción en eucariontes, el eIF4E (4EBP). S6K es una proteína de aproximadamente 70 kDa que fosforila varios sustratos, siendo el blanco mejor caracterizado la proteína ribosomal S6 de la subnidad menor del ribosoma (S6rp). Aunque no se ha demostrado la presencia de la proteína 4EBP en plantas, existen evidencias de la ruta de señalización que involucra a la TOR en organismos vegetales (Levine y col., 2006). Para hacer la caracterización de esta ruta en estos últimos organismos, es necesario contar con herramientas nuevas, como son los anticuerpos contra las proteínas, que forman parte de la ruta de señalización. Así, el objetivo del presente trabajo consiste en expresar y purificar un fragmento conservado de la proteína ribosomal S6, con la finalidad de posteriormente obtener anticuerpos policlonales contra esta proteína en plantas utilizando la técnica del DNA recombinante.