Caracterización de MONOTcTIM una mutante monomérica de la triosafosfato isomerasa de Trypanosoma cruzi

Abstract

In this paper the structure and thermal denaturation of a monomeric mutant triosephosphate of monoTcTIM called Trypanosoma cruzi was studied. The protein was purified by filtration chromatography. The structure was characterized through studies of intrinsic and extrinsic fluorescence. Denaturation was followed by changes in the tertiary structure through studies of intrinsic and extrinsic fluorescence as a function of temperature. It was found that the purification protocol allows obtaining 0375 mg per L culture monoTcTIM. Structural studies show that this protein is structured despite mutations contained therein and tends to aggregate at temperatures above 55 ° C, so that part of the denaturation is reversible characterized and is in the range 10 at 55 ° C. This study is the first to report the characterization of the thermal denaturation of a monomeric mutant triosephosphate.

En este trabajo se estudió la estructura y desnaturalización térmica de una mutante monomérica de la triosafosfato isomerasa de Trypanosoma cruzi denominada monoTcTIM. La proteína se purificó por medio de cromatografía de filtración. La estructura se caracterizó por medio de estudios de fluorescencia intrínseca y extrínseca. La desnaturalización se siguió por medio de cambios en la estructura terciaria a través de estudios de fluorescencia intrínseca y extrínseca como función de la temperatura. Se encontró que el protocolo de purificación permite la obtención de 0.375 μg por L de cultivo de monoTcTIM. Los estudios estructurales muestran que esta proteína está estructurada a pesar de las mutaciones que contiene, y tiende a agregarse a temperaturas mayores de 55°C, por lo que se caracterizó la parte de la desnaturalización que es reversible y se encuentra en el intervalo de 10 a 55°C. Este estudio es el primero en reportar la caracterización de la desnaturalización térmica de una mutante monomérica de la triosafosfato isomerasa.