Análisis de la transposición de los determinantes de resistencia a cromato y mercurio del plásmido pUM505

Abstract

PUM505 of Pseudomonas aeruginosa The plasmid has genes involved in resistance to chromate and mercury within a region called island resistance to heavy metals which have a size of ~ 31 kb . These determinants outskirts are mobile elements that are part of transposons suggest . Various chromate resistance transposon and mercury have been studied , however , has not proven its ability to translocate to other regions of DNA. The aim of this study was to determine whether potential transpones chromate resistance ( Tnchr ) and mercury ( Tnmer ) have the ability to translocate . For this mutagenesis strategy employing as selective pressure mercury concentrations chromate and forcing the system into the transposon or may be translocated within the carbenicillin resistance gene , selecting mutants lost the antibiotic resistance were used. To verify the phenotype of resistance mutants susceptibility curves increasing concentrations of these ions are employed , yielding both resistance . Competent cells of E. coli JM101 with the plasmid DNA of the mutants were transformed , yielding a band of size larger than 23 kb . To verify the presence of transposons chromate and / or mercury, a PCR analysis was performed to identify the gene CHRA and susceptibility curve giving mercury resistance phenotype . The results suggest that the transposonesTnchr / mer are part of a movable member having the ability to translocate .

El plásmido pUM505 de Pseudomonas aeruginosa posee genes involucrados en la resistencia a cromato y mercurio dentro de una región denominada isla de resistencia a metales pesados que tiene un tamaño de ~31 kb. Estos determinantes se encuentran aledaños a elementos móviles que sugieren forman parte de transposones. Diversos transposones de resistencia a cromato y mercurio se han estudiado, sin embargo, no se ha comprobado su capacidad de translocarse a otras regiones de DNA. El objetivo de este trabajo fue determinar si los posibles transpones de resistencia a cromato (Tnchr) y mercurio (Tnmer) tienen la capacidad de translocarse. Para ello se utilizó una estrategia de mutagénesis empleando como presión selectiva concentraciones de cromato y mercurio, forzando al sistema para que el o los transposones pudieran translocarse dentro del gen de resistencia a carbenicilina, seleccionando mutantes con perdida a resistencia al antibiótico. Para verificar el fenotipo de resistencia de las mutantes se emplearon curvas de susceptibilidad a concentraciones crecientes de dichos iones, obteniéndose la resistencia a ambos. Se transformaron células competentes de E. coli JM101 con el DNA plasmídico de las mutantes, obteniéndose una banda de tamaño superior a 23 kb. Para comprobar la presencia de los transposones de cromato y/o mercurio, se hizo un análisis por PCR para identificar el gen chrA y una curva de susceptibilidad a mercurio dando fenotipo de resistencia. Los resultados sugieren que los transposonesTnchr/mer forman parte de un elemento móvil que tiene la capacidad de translocarse.