Producción y caracterización molecular in vitro de células dendríticas obtenidas a partir de médula ósea de pollo

Abstract

The immune system is a complex network of molecules, cells, tissues and organs that work together to protect the body from foreign agents (antigens) such as viruses and bacteria, which may be harmful to the body and generate viral and microbial infections, cancer or autoimmune diseases. Antigens must be processed and presented by antigen-presenting cells (APCs) so they can be recognized by specific effector cells. Dendritic cells (DCs) are APCs that are able to stimulate T lymphocytes. Current evidence shows that DCs can also activate B lymphocytes and NK cells. In the current work DCs precursor cells were isolated from chicken bone marrow and in vitro differentiation was carried out with 3 and 7-day cultures using cytokines GM-CSF and IL-4. In this process, LPS, Escherichia coli bacteria and viral peptide GP5 were used to induce the maturation of the DCs. Later, morphological and molecular characterizations were performed and identified the expression of transcription factor Zbtb46 specific to DCs. In vitro obtaining of DCs has become a useful tool in immunology because of their function in the immune response and are therefore a key tool for generating vaccines that may be useful in the future for cancer therapy and/or infectious diseases. DCs can also be employed to generate recombinant monoclonal antibodies using the Phage Display technology to obtain high affinity antigen specific antibodies.

El sistema inmune es una red compleja de moléculas, células, tejidos y órganos que trabajan en conjunto para proteger al organismo de agentes extraños (antígenos): como virus y bacterias, los cuales pueden resultar dañinos para el organismo, generando infecciones virales, microbianas, cáncer o enfermedades autoinmunes. Los antígenos necesitan ser procesados y presentados por células presentadoras de antígeno (APCs), y finalmente pueden ser reconocidos por células efectoras específicas. Las células dendríticas (DCs, del inglés, Dendritic cells) son APCs profesionales y poseen paralelamente la capacidad de estimular a los linfocitos T. Actualmente hay evidencias de que las DCs también pueden activar a los linfocitos B y a las células NK. En el presente trabajo se aislaron células precursoras de DCs a partir de médula ósea de pollo, se llevó a cabo su diferenciación in vitro, bajo condiciones de cultivo establecidas por 3 y 7 días, con el uso de citocinas GM-CSF e IL-4. El procedimiento consistió en inducir la maduración de las DCs con los antígenos: LPS, bacterias Escherichia coli y el péptido viral GP5. Se realizó la caracterización morfológica y molecular de las DCs de pollo, donde se identificó la expresión del factor de transcripción Zbtb46 específico de DCs. La obtención de DCs in vitro se ha vuelto una herramienta de gran utilidad en Inmunología, debido a la función que éstas han demostrado en la respuesta inmune y por ello son un blanco fundamental como herramienta para la generación de vacunas, que en un futuro pueden ser de utilidad en la terapia contra el cáncer, y/o enfermedades infecciosas. Paralelamente las DCs pueden emplearse en la generación de anticuerpos monoclonales recombinantes, mediante el uso de la técnica de Phage Display para obtener anticuerpos específicos de antígeno con alta afinidad.