Estudio genético de los subtipos de Blastocystis en niños que acuden al Hospital Infantil de Morelia

Abstract

Blastocystis sp is the intestinal parasite mostly reported today, in both developing and developed countries (1-4), whose pathogenic role is highly controversial, associating it with he 17 known subtypes, most of which are zoonotic. (5 ) This study type open, observational, prospective, part of a nationwide project. Stool specimens from children referred Outpatient Service older than one year, to whom it was applied a survey to know the clinical and hygienic habits prior written consent of the parents were included. The samples underwent serial coproparasitoscopic (CPS) with direct examination of fresh, concentration by sedimentation (FE) and float (Sucrose) and stool culture, then preserving them in alcohol 70% and refrigerated at 4 C until extraction DNA (Qiagen). They underwent chain reaction (PCR) diagnostic endpoint for Blastocystis (Using Primers Santin and STIs); then held purification (AxyPrep-PCR Clean-up 96) and quantification for sequencing and determination of subtype (genotype) at GenBank data. 113 samples were studied, of which 86.7% were positive for Blastocystis with PCR, with primers Santin 80.4%, 71.7% and 84.8% STI both. Of the 52 sequenced samples corresponds to 50% subtype 1, subtype 25% 2, the subtype 3 23.08% 1.92% and 7 subtype. Subtypes 3 and 7 were not associated with any symptoms, the subtype 1 was associated with constipation (p 0.05, df 1) and subtype 2 was associated with diarrhea (p 0.05, df 1). For the subtype 1 risk factor was mostly associated defecate on the floor (RR 2.6), material austere house (RR 2.4) and not washing hands before eating (RR 2.3); for subtype 2 on live animals (RR 8), history of throwing worms (RR 5.4) and take tap water (RR 3); for subtype 3 eating street food (RR 2.3), material austere house (RR 2.2) and take tap water (RR 2). The subtype 7 is not associated with any risk factor.

Blastocystis sp es el parásito intestinal mayormente reportado en la actualidad, tanto en países en desarrollo como en desarrollados (1-4), cuyo papel patógeno es altamente controvertido, asociándolo con los 17 subtipos conocidos, la mayoría de los cuales son zoonóticos.(5) Este un estudio de tipo abierto, observacional y prospectivo, que forma parte de un proyecto a nivel nacional. Se incluyeron muestras de excremento de niños remitidos del Servicio de Consulta Externa mayores de un año, a quienes se les aplicó una encuesta para conocer las manifestaciones clínicas y hábitos higiénicos, previo consentimiento escrito por parte de los padres. A las muestras se les realizó coproparasitoscópico en serie (CPS) con examen directo en fresco, concentración por sedimentación (F-E) y por flotación (Sacarosa) así como oprocultivo, preservándolas posteriormente en alcohol al 70% y refrigeración a 4 C hasta la extracción de ADN (Qiagen). Se sometieron a reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de punto final diagnóstica para Blastocystis (Utilizando Primers de Santin e ITS); a continuación se llevó a cabo la purificación (AxyPrep-96 PCR Cleanup) y cuantificación para la secuenciación y determinación de subtipo (genotipo) consultando los datos del GenBank. Se estudiaron 113 muestras, de las cuales el 86.7 % dieron positivas a Blastocystis con PCR, 80.4% con Primers Santin, 71.7% con ITS y 84.8% en ambos. De las 52 muestras secuenciadas el 50% corresponde al subtipo 1, el 25% al subtipo 2, el 23.08% al subtipo 3 y el 1.92% al subtipo 7. Los subtipos 3 y 7 no estuvieron relacionados con ningún síntoma, el subtipo 1 se asoció con estreñimiento (p 0.05, gl 1) y el subtipo 2 se asoció con diarrea (p 0.05, gl 1). Para el subtipo 1 el factor de riesgo mayormente asociado fue el defecar en el suelo (RR 2.6), material de la casa austero (RR 2.4) y el no lavarse las manos antes de comer (RR 2.3); para el subtipo 2 el convivir con animales (RR 8), antecedente de arrojar lombrices (RR 5.4) y tomar agua de la llave (RR 3); para el subtipo 3 el comer alimentos en la calle (RR 2.3), material de la casa austero (RR 2.2) y tomar agua de la llave (RR 2). El subtipo 7 no se asoció con ningún factor de riesgo.