Efecto de diferentes fuentes de C y N sobre la conidación de Trichoderma spp.

Abstract

Fungal analysis contributes to understand different biological phenomena such as cell-cell interactions, the immune response, drug resistance, etc.; this knowledge is useful to develop new diagnostic methods and to make the most of their properties in the medical and biotechnological areas. The cell wall components in fungi such as quitine, β-α glucans, manoproteins, lipids, pigments, and organic and inorganic salts give shape to their cells and protect them against physical damage and also provide them with a surface net charge. Fungal spores or conidias are responsible for perpetuation of the species and can also be used to identify genera or species. Thus, in this work the effect of different C and N sources as well as pH on the growth and conidiation of Trichoderma atroviride IMI 206040 was studied. Capillary Electrophoresis was used in order to detect possible changes in the conidial surface as a consequence of growing under different conditions. Trichoderma atroviride IMI 206040 was cultured in Vogel Agar and then cultured again in modified Vogel Agar with different sources of C (glucose, dextrose, maltose, lactose, fructose, xilose and albumin), N (nitrite, nitrate, urea, cystein, alanin) and pH (5, 5.9, 7, 8). Incubation took place at 28°C. Growth curves were obtained by measuring the fungal diameter every 24 h with a vernier. Conidia were harvested and washed three times with sterile distilled water and suspended in BGE for electrophoretic analysis. They were analyzed in a Capillary Electrophoresis system (P/ACE MDQ Glycoprotein System, Beckman Coulter) equipped with DAD al 201 nm, T=25°C, (-) 17 V, 100 μm i.d. capillary with 50 cm LT. BGE: HEPES 10 mM, pH 7.

El análisis de los hongos contribuye al entendimiento de fenómenos biológicos como son interacciones célula-célula, respuesta inmune, resistencia a medicamentos; así como al desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico, el aprovechamiento de sus diversas propiedades en áreas de interés médico y biotecnológico, por mencionar ejemplos. Los componentes de la pared celular de los hongos, como la quitina, β-α glucanas, manoproteínas, lípidos, pigmentos y sales orgánicas e inorgánicas dan forma y protección a los hongos contra daños físicos y les confieren propiedades fisicoquímicas utilizadas para su identificación y caracterización. Las conidias y/o esporas de los hongos son el medio de diseminación y es a través de éstas que se pueden identificar especies fúngicas. En este estudio se analizó el efecto de la fuentes de carbono, nitrógeno y pH, sobre la germinación, velocidad de crecimiento y conidiación de Trichoderma atroviride IMI 206040. Además, se usó la Electroforesis Capilar para detectar posibles cambios en las superficies celulares por efecto del medio de cultivo. La cepa en estudio se sembró en agar Vogel para posteriormente ser inoculada en los demás medios con diferentes fuentes de carbono (glucosa, dextrosa, maltosa, lactosa, fructuosa, xilosa, albumina), de nitrógeno (nitrito, nitrato, urea, cisteína, alanina) y pH (5, sin modificar, 7, 8) e incubar a 28°C. Se registró la velocidad de crecimiento y la aparición de conidias midiendo el diámetro de crecimiento con vernier cada 24 h. Se colectaron las conidias y fueron lavadas con H2O estéril para eliminar restos de micelio, agar y metabolitos. Se empleó el Sistema de Electroforesis Capilar P/ACE MDQ Beckman Coulter® con DAD a 201 nm, T=25°C, (-) 17Kv. Se utilizó un capilar de sílice fundida de 100 μm de d.i. y 50 cm de LT. Los corrimientos electroforéticos se realizaron con un buffer de corrimiento (BGE) HEPES 10mM, pH 7.