Identificación de especies fúngicas mediante electroforesis capilar

Abstract

Fungi are microscopic, eukaryotic, branched and often filamentous organisms that produce spores. There are about 100,000 different species already described and only 8,000 are phytopathogenic, that is fungi that can cause plant diseases. Fungi are important in agriculture because they can damage crops which are important from the economical point of view. Capillary electrophoresis (CE) is a separation technique based on the migration of charged particles due to the action of an electric field; in previous works a characteristic electrophoretic signal was observed for certain fungus so it was decided to find out if that signal can be observed for other genus and species and if so, such signal can be used as an alternative for the identification of fungal cells. OBJECTIVE: To establish if certain electrophoretic signals can be specific of fungal genus and/or species. MATERIALS AND METHODS: Culture Media: PDA, MDA, Sabouraud and Vogel minimum medium, were used to promot growth of 13 strains from 5 different genus (Fusarium, Penicillium, Pestalotiopsis, Pochonia and Umbelopsis) provided by the CMEB. For the electrophoretic experiments, a P/ACE MDQ Capillary Electrophoresis System (Beckman Coulter®) was used. First, the growth kinetics of all strains were obtained in the four culture media and conidiation time was noted. Conidia produced were collected in a microtube with sterile water, processed and finally suspended in background electrolyte (BGE) leaving to stand for 24 hours. 400 μL of supernatant were mixed with 200 μL of fresh BGE and the resulting solution was analyzed by CE.

Los hongos son pequeños organismos productores de esporas, generalmente microscópicos, eucarióticos, ramificados y a menudo son filamentosos. De las 100.000 que se conocen cerca de 8.000 son fitopatógenos, es decir, son hongos que causan enfermedades en las plantas. Constituyen un grupo de mucha importancia en la agricultura debido a su gran número y enorme capacidad de reproducción. A nivel mundial los hongos fitopatógenos constituyen el grupo más importante desde el punto de vista económico en cuanto a su frecuencia de aparición y daño que pueden causar. La electroforesis capilar (EC) es una técnica de separación que se basa en la movilidad o velocidad de migración de partículas cargadas debido a la acción de un campo eléctrico; en trabajos previos se observó una señal característica para cierto hongo por lo que se quiere establecer si esa señal electroforética se presenta en otras especies/géneros para que dicha técnica pueda servir como una alternativa para la identificación de células fúngicas. OBJETIVO: Establecer las señales electroforéticas características de género y/o especie de diferentes especies fúngicas. MATERIALES Y METODOS: Medios de cultivo PDA, MDA, agar Sabouraud y medio mínimo Vogel, que se utilizaron para la siembra de 13 cepas de 5 géneros distintos (Fusarium, Penicillium, Pestalotiopsis, Pochonia y Umbelopsis) proporcionados por el CMEB. Se utilizó un equipo de EC P/ACETM MDQ Capillary Electrophoresis System Beckman Coulter ® para llevar a cabo los corrimientos electroforéticos. Primeramente, se obtuvieron las cinéticas de crecimiento de todas las cepas en los cuatro medios de cultivo. Se anotó el tiempo de conidiación. Las conidias producidas se colectaron en un microtubo con agua estéril, se procesaron y finalmente se suspendieron en el buffer de corrimiento dejándolas reposar 24 h. Se mezclaron 400 μL del sobrenadante con 200 μL del buffer de corrimiento y la solución resultante se analizó por EC.