Identificación de los genes de fusión PML/RARα y CBFβ/MYH11 en pacientes con leucemia mieloblástica aguda

Abstract

Molecular characterization of patients with acute myeloid leukemia (AML) provide to doctors additional information about prognosis and evolution of the disease, as well as the proper treatment. According to the World Health Organization (WHO), the AML with recurrent genetic abnormalities t(8;21) (q22; q22) AML1/ETO, (q21; q22) t(15;17) PML/RARα and inv (16) (p13; q22) CBFβ-MYH11, are considered as good prognosis. Objective: To evaluate the expression of fusion genes PML/RARα and CBFβ/MYH11 in patients with acute myeloid leukemia. Material and methods: Samples of bone marrow or peripheral blood of 14 patients with AML, were taken, and leukocytes were purified. RNA was isolated by Tripure method, cDNA was generated and fusion genes were detected by PCR and nested PCR. Results: Were included 6 patients with AML-M3 and 8 patients with AML-M4. Was amplified the control gene ABL in 10 cases and only in these cases were submitted into the search of the fusion genes. Of the 4 cases with AML-M3 analyzed, 2 expressed the bcr1 and bcr3 isoforms of the gene fusion PML/RARα. Of the 6 cases of AML-M4, only one expressed the fusion gene CBFβ/MYH11, A isoform. Conclusions: We established the conditions of RT-PCR for identification of both fusion genes. The frequency of expression of the fusion genes PML/RARα and CBFβ/MYH11 were lower than reported in the literature. This is due probably to the small size of the samples, and that several of them came from patients with treatment.

La caracterización molecular de los pacientes con leucemia mieloblástica aguda (LMA) permite al médico tener información adicional sobre el pronóstico y evolución de la enfermedad, así como el tratamiento más adecuado. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la LMA con anormalidades genéticas recurrentes t(8;21) (q22;q22) AML1/ETO, t(15;17) (q22;q21) PML/RAR? e inv (16) (p13;q22) CBF?/MYH11, son considerados de buen pronóstico. Objetivo: Evaluar la expresión de los genes de fusión PML/RAR? y CBF?/MYH11 en pacientes con leucemia mieloblástica aguda. Materiales y métodos: Se tomaron muestras de médula ósea o sangre periférica de 14 pacientes con LMA, se purificaron los leucocitos mediante lisis de eritrocitos. Se aisló el RNA por el método de Tripure, se generó el cDNA y se buscaron los genes de fusión mediante PCR y PCR anidada. Resultados: Se incluyeron 6 pacientes con LMA-M3 y 8 pacientes con LMA-M4. Se amplificó el gen control ABL y sólo se logró identificar en 10 casos y sólo en estos casos se sometieron a la búsqueda de los genes de fusión. De los 4 casos con LMA-M3 analizados, 2 expresaron el gen de fusión PML/RAR?, isoforma bcr1 y bcr3. De los 6 casos de LMA-M4, sólo uno expresó el gen de fusión CBF?/MYH11, isoforma A. Conclusiones: Se lograron establecer las condiciones de RT-PCR para la identificación de ambos genes de fusión. La frecuencia de expresión de los genes de fusión PML-RAR? y CBF?-MYH11 fueron inferiores a los reportados en la literatura. Esto se debió probablemente al tamaño de la muestra y que varias de las muestras provenían de pacientes con tratamiento.