Evaluación de la maduración in vitro de ovocitos equinos utilizando suero de yegua en dos etapas del estro, y uniones heterólogas con espermatozoides equinos tratados con heparina y procaína

Abstract

The aim of this study was to evaluate the in vitro maturation of equine oocytes using estrous mare serum (EMS) and ovulation (OMS) obtained at 36 h after the onset of the first signs of estrus. The oocytes were recovered from slaughtered mares during the breeding season (spring-summer) and non-breeding season, were handled with phosphate- buffered saline (PBS) or TCM 199 (Tissue culture medium) with 20 % horse serum in estrus (EMS), into two groups. The oocyte maturation using 10 % of EMS in the first treatment, and 10 % of EMS plus 5% horse serum in ovulation (OMS) in the second treatment, no significant statistical differences where found (P < 0.05), although more maturations where obtained with this last one. During the reproductive stage of maturation the percentage obtained was 18 % higher than in non-reproductive stage. Moreover, heterologous tests were performed with sow oocyte and frozen and thawed equine sperm using two treatments, heparin and procaine and a control group, with the aid of a microscope was determined (by counting) the number of sperm who adhered to the oocyte’s zona pellucida. The equine sperm treated with procaine show hyperactivity, an average of 250 sperms showed primary and secondary binding in the porcine ZP, after one hour of incubation, heparin-treated sperm show normal movement, an average of 135 sperm were able to attach to the zona pellucida of pig oocytes. Approximately 70% of sperm that were not treated died.

El objetivo del presente estudio fue evaluar la maduración in vitro de ovocitos equinos, utilizando suero de yegua en estro (EMS) y en ovulación (OMS) obtenido a las 36 h posteriores a la aparición de los primeros signos del celo. Los ovocitos fueron recuperados de yeguas sacrificadas durante la temporada reproductiva (primavera-verano) y la temporada no reproductiva, se manipularon con suero salino tamponado en fosfatos (PBS) o TCM 199 (Tissue culture medium) con 20% de suero de yegua en estro (EMS), en dos grupos. La maduración de los ovocitos utilizando 10% de EMS en el primer tratamiento, y 10% de EMS más 5% de suero de yegua en ovulación (OMS) en el segundo tratamiento, no presentaron diferencias estadísticas significativas (P < 0.05), a pesar que se obtuvieron mayor número de maduraciones con este último. Durante la etapa reproductiva el porcentaje de maduración obtenido fue 18% más alto que en la etapa no reproductiva. Por otra parte, se realizaron pruebas heterólogas, con ovocitos de cerda y espermatozoides equinos congelados y descongelados, utilizando 2 tratamientos, heparina y procaína además de un grupo control, con la ayuda de un microscopio se determinó por medio de conteo, el número de espermatozoides que se adhirieron a la zona pelúcida de los ovocitos. Los espermatozoides equinos tratados con procaína muestran hiperactividad, un promedio 250 espermatozoides presentaron unión primaria y secundaria en la ZP porcina, después de una hora de incubación, los espermatozoides tratados con heparina muestran movimiento normal, un promedio de 135 espermatozoides, lograron adherirse a la zona pelúcida de los ovocitos de cerda. Aproximadamente el 70 % de los espermatozoides que no recibieron tratamiento murieron.