Aislamiento del ADNc del gen de la calpaína 3 de guajolote domesticado (Meleagris gallopavo gallopavo)

Abstract

Calpains are non-lysosomal, calcium dependent and sodium dependent (calpain 3) cysteine proteases, belonging to the papain superfamily. Calpains are considered intramolecular modulators of proteases and are involved in several cellular functions like signal transduction and cellular morphogenesis (e. g. muscle tissue remodeling), also play a crucial role in the induction of the cell to enter into a functional repose phase. Calpains are known to participate in the weakening of sarcomere myofibrils post mortem, giving tenderness to the meat as result. It has been established that calpains are present in chicken and turkey muscle having a similar role in the previously mentioned cellular processes. Nevertheless, there is a lack of genetic-molecular studies for this enzyme in domesticated backyard turkey from México. The objectives of this study was the characterization of calpain 3 (CAPN3) cDNA with genomic and mRNA predicted sequences reported for M. g. gallopavo, and to realize a comparative analysis of CAPN3 cDNA with gene sequences published on international database. RNA was isolated of an adult backyard turkey breast and thigh muscle tissues obtained of a flock from Huiramba, Michoacan. cDNA amplification was realized by RT-PCR, using RNA total and oligonucleotides designed over a calpain 3-like gene which was identified in a turkey genome reported in database. The PCR products were ligated in a pCR4-TOPO vector and the obtained plasmids were introduced into TOP10 Escherichia coli strain. Clustal analysis allowed the identification of domains and detection of one change of an aminoacid inside the catalytic domain CysPc (Ser/Pro330) and another one inside the C2L domain (Ser/Gly472).

Las calpaínas son cisteín-proteasas no lisosomales dependientes de calcio y/o dependientes de sodio (calpaína 3), que pertenecen a la súper familia de la papaína. Se consideran moduladores intracelulares de proteasas y gobiernan varias funciones celulares así como de transducción de señales y morfogénesis celular (por ej. remodelado del tejido muscular), desempeñan un papel crucial en la inducción de la entrada en la célula en una fase de reposo funcional. Se sabe que participan en el debilitamiento de las miofibrillas del sarcómero post mortem, dando como resultado la suavidad de la carne. Se ha establecido que las calpaínas están presentes en el pollo y en músculo de guajolote teniendo un papel similar en los procesos antes mencionados. Sin embargo, hasta ahora se carece de estudios genético moleculares de ésta enzima en el guajolote domesticado de traspatio en México. El objetivo de éste estudio fue caracterizar el ADNc del gen de calpaína 3 (CAPN3) que se expresa en tejido muscular de guajolote domesticado de traspatio Meleagris gallopavo gallopavo, realizar un análisis de comparación del ADNc del gen de CAPN3 con las secuencias genómicas y del ARNm predicho reportados previamente para M. g. gallopavo, y realizar un análisis de comparación del ADNc de CAPN3 con las secuencias de genes publicadas en bases de datos internacionales. Se aisló el ARN total de muestras de tejido muscular de pechuga y muslo de un individuo adulto de guajolote de traspatio obtenido de una parvada de Huiramba, Michoacán. La amplificación ADNc se realizó mediante RT-PCR, utilizando el ARN total y oligonucleótidos diseñados con base en la secuencia del gen de calpaína 3-like, identificado en un genoma de guajolote reportado en base de datos. Los productos de amplificación se ligaron en el vector pCR4-TOPO y los plásmidos obtenidos se introdujeron en la cepa TOP10 de Escherichia coli.