Diseño y expresión de un péptido derivado de la proteína RBP-Jk de Mus musculus con alta afinidad por la proteína Hairless de Drosophila melanogaster

Abstract

The Notch signaling pathway is mainly required during early embryo development in animals. For this reason, it is important in cell differentiation and, as a consequence, in organogenesis. Notch pathway, with the support of another signaling pathways, rules the complex spatial and temporal organization that design and compose the new multicellular organism. Hairless protein has the ability to negatively modulates this transduction signaling pathway. Despite efforts to detect Hairless in higher animals, a homologue protein has no yet been identified. This is essential to understand the regulatory processes during embryo development and other pathological processes in which Notch pathway is involved. RBP-Jk, the homolog of Su(H) in mammals has a binding domain to Hairless, in the carboxyl ending region and form a negative functional transcriptional complex that regulates the Notch Signaling in Drosophila melanogaster. Using analysis in silico and molecular biology techniques was a peptide construction was design that function like a bait to catch a protein with a similar function and binding site protein like Hairless.

La vía de señalización Notch (VN) es una de las rutas de comunicación celular que se utiliza principalmente durante el desarrollo embrionario temprano de los individuos, participando en la diferenciación celular y por lo tanto en la organogénesis. La VN, en conjunto con otras vías de transducción de señales, permite las complejas organizaciones espacio-temporales que orquestan y diseñan a los organismos multicelulares. La proteína Hairless (H) es el principal regulador negativo de esta vía y, por lo tanto, funciona como un antagonista de la misma. Si bien ha sido caracterizada en Drosophila melanogaster y otros insectos, esta proteína de vital importancia para la vía, no cuenta con un homólogo reportado en mamíferos, solo se sabe que el complejo de proteínas SHARP/MINT/SPEN se une a RBP-Jk/CBF1 para regular de manera negativa la vía de Notch, por lo que se cree que en dicho complejo se encuentre el parálogo de H. Sin embargo, aún no ha habido estudios concluyentes al respecto, ya que dichas proteínas no han sido caracterizadas funcionalmente. Recientemente se demostró que RBP-Jk/CBF1 tiene la capacidad de unir en la región carboxilo terminal, a la proteína H de D. melanogaster para armar un complejo regulador negativo transcripcionalmente funcional en embriones de mosca. Mediante PCR se logró amplificar el fragmento CTD de RBP-Jk de Mus musculus, se clonó y se produjo la expresión del péptido para diseñar una trampa para capturar una proteína, con una función semejante a la de Hairless, que comparta el sitio de unión al fragmento CTD y funciones similares de regulación negativa en la vía Notch.