Generación y caracterización de una variante de colonia pequeña de Staphylococcus aureus: evaluación de la persistencia en células epiteliales mamarias bovinas

Abstract

Staphylococcus aureus es una bacteria Gram (+) asociada a enfermedades crónicas y persistentes tanto en la medicina humana (ej. osteomielitis) como en la veterinaria (ej. mastitis). Es el principal patógeno relacionado con la mastitis bovina subclínica (crónica y asintomática), enfermedad de gran importancia en la ganadería bovina lechera a nivel mundial. Esta bacteria es facultativa intracelular lo que le permite evadir la respuesta inmune del hospedero y la terapia antimicrobiana. Esto favorece la generación de variantes de colonia pequeña (SCVs) que presentan características distintas a la cepa silvestre (ej. crecimiento lento, auxotróficas, no hemolíticas). Las SCVs se asocian con la persistencia y cronicidad de diversas enfermedades en humanos, pero hasta el momento existen pocos estudios de SCVs de S. aureus asociados a mastitis bovina. El objetivo del trabajo fue generar y caracterizar una SCVs de S. aureus y evaluar su persistencia intracelular en células de epitelio mamario bovino (CEMB). Se utilizó la cepa S. aureus ATCC27543 aislada de un caso de mastitis clínica y con capacidad de internalizar diferentes tipos celulares. Se generó una SCV estable utilizando gentamicina (1 g/ml) como molécula inductora. Esta presentó un crecimiento lento (tiempo de generación de 523 min) con respecto a la cepa silvestre S. aureus ATCC27543 (tiempo de generación de 119 min), auxotrofía para menadiona y una disminución en la expresión de los genes de virulencia agrA, RNAIII y fnbpA. A través de ensayos de protección con gentamicina se observó que la SCV persistió intracelularmente en las CEMB aún a las 72 h, sin inducir apoptosis. En conclusión, se obtuvo una SCV de la cepa de S. aureus ATCC27543 que persiste intracelularmente sin afectar la viabilidad de las CEMB.

Staphylococcus aureus es una bacteria Gram (+) asociada a enfermedades crónicas y persistentes tanto en la medicina humana (ej. osteomielitis) como en la veterinaria (ej. mastitis). Es el principal patógeno relacionado con la mastitis bovina subclínica (crónica y asintomática), enfermedad de gran importancia en la ganadería bovina lechera a nivel mundial. Esta bacteria es facultativa intracelular lo que le permite evadir la respuesta inmune del hospedero y la terapia antimicrobiana. Esto favorece la generación de variantes de colonia pequeña (SCVs) que presentan características distintas a la cepa silvestre (ej. crecimiento lento, auxotróficas, no hemolíticas). Las SCVs se asocian con la persistencia y cronicidad de diversas enfermedades en humanos, pero hasta el momento existen pocos estudios de SCVs de S. aureus asociados a mastitis bovina. El objetivo del trabajo fue generar y caracterizar una SCVs de S. aureus y evaluar su persistencia intracelular en células de epitelio mamario bovino (CEMB). Se utilizó la cepa S. aureus ATCC27543 aislada de un caso de mastitis clínica y con capacidad de internalizar diferentes tipos celulares. Se generó una SCV estable utilizando gentamicina (1 ?g/ml) como molécula inductora. Esta presentó un crecimiento lento (tiempo de generación de 523 min) con respecto a la cepa silvestre S. aureus ATCC27543 (tiempo de generación de 119 min), auxotrofía para menadiona y una disminución en la expresión de los genes de virulencia agrA, RNAIII y fnbpA. A través de ensayos de protección con gentamicina se observó que la SCV persistió intracelularmente en las CEMB aún a las 72 h, sin inducir apoptosis. En conclusión, se obtuvo una SCV de la cepa de S. aureus ATCC27543 que persiste intracelularmente sin afectar la viabilidad de las CEMB.