Caracterización funcional de la proteína NAC-2 en la regulación negativa de la expresión de genes mediados por la vía de señalización Notch

Abstract

The Notch signaling pathway (NSP) is a highly conserved cell communication mechanism in most animals and its deregulation is involved with several diseases such as cancer. Several proteins responsible for the negative regulation of the NSP target genes have been reported and all these co-repressor proteins interact with the DNA-binding transcription factor CSL to, potentially, repress the transcription of these genes. Recently, in our laboratory, the transcriptional repressor protein NAC-2 was identified as a protein possibly involved in the regulation of NSP in mammals. Therefore, we decided to investigate the possible participation of NAC-2 in the regulation of the NSP target genes. Using a vector that contains a reporter gene of the luciferase enzyme sensitive to the activity of the NSP, that contains has some consensus regulatory elements of binding to CSL, we evaluate the effect of NAC-2 on the activity of the luciferase enzyme, by transfection of MCF-7 cells. The data obtained showed that NAC-2 decreased the activity of luciferase by 50%, which suggests that NAC-2 functions as an inhibitor of the expression of the target genes of the NSP. It is likely that this NAC-2 inhibitory activity requires the interaction with the transcriptional factor CSL.

La vía de señalización Notch (VSN) es un mecanismo de comunicación celular altamente conservado en casi todos los animales, y su desregulación está involucrada con diversas enfermedades como el cáncer. Varias proteínas responsables de la regulación negativa de los genes blanco de la VSN, han sido reportadas, y todas estas proteínas co-represoras interaccionan con el factor transcripcional de unión a ADN, CSL, para eventualmente, reprimir la transcripción de estos genes. Recientemente, en nuestro laboratorio se identificó a la proteína represora transcripcional NAC-2, como una proteína probablemente involucrada en la regulación de la VSN en mamíferos. Por lo anterior, decidimos investigar la posible participación de NAC-2, en la regulación de los genes blanco de la VSN. Empleando un vector que contiene un gen reportero de la enzima luciferasa sensible a la actividad de la VSN, debido a que tiene algunos elementos regulatorios consenso de unión a CSL, evaluamos el efecto de NAC-2 sobre la actividad de la enzima luciferasa, por transfección de las células MCF-7. Los datos obtenidos demostraron que NAC-2 disminuyó en un 50% la actividad de la luciferasa, lo cual sugiere que NAC-2 funciona como un inhibidor de la expresión de los genes blanco de la VSN. Es probable que esta actividad inhibidora de NAC-2 requiera de la interacción con el factor transcripcional CSL.