Efecto del aceite esencial de Tagetes lucida en una biopelícula de quitosano sobre Botrytis cinerea en frutos de zarzamora (Rubus fruticosus Cv. Tupi)

Abstract

In the present research the antifungal effect of the essential oil of the aerial part (stem, leaves and flowers) of Tagetes lucida (Santa Maria), it was determinated by hidrodistillation method, which was analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). Antifungal activity in vitro was determined as a percentage of inhibition on the mycelial growth of Botrytis cinerea, determining the minimum inhibitory concentration 100% (MIC 100%) by applying 0, 0.01, 0.025, 0.05, 0.075 to 0.1 μg/mL of essential oil/mL. Subsequently the effect of the CMI 100% on the mortality of the spores of B. cinerea was evaluated during 7 days and in vitro assays of blackberry fruits (Rubus fruticosus Cv. Tupi) inoculated with 1x106 spores/mL. In all experiments ethanol was used ethanol as vehicle of dilution, that was tested as control negative and the fungicide commercial Tecto60 (thiabendazole) as control positive. GC-MS analysis identified the terpene compounds β-pinene, β-trans-ocimene, β-ocimene, β-linalool, estragole, methyl eugenol and β-caryophyllene, β-cubebene. The 75% of the essential oil is composed by the terpenes estragole and methyl eugenol with a content of 521.8 μg/mL and 464.6 μg/mL, respectively. At seven days after the in vitro culture of B. cinerea, the concentration of 0.05 μg/mL was the lowest that showed 100% inhibition on mycelia of B. cinerea (CMI 100%), inhibited the spores germination and exerted a 100% mortality of these, and the inoculated fruits did not shows symptoms of the infection, stored at 4 °C and 25 °C. To determine the optimal concentration of chitosan as coating of blackberry fruits, viscosity, hardness and deformation of hardness were measure in the biofilms in three concentrations (0.5, 1.0 and 1.5%).

En la presente investigación se determinó el efecto antifúngico del aceite esencial de Tagetes lucida (Santa María), obtenido de la parte aérea (tallo, hojas y flores) por el método de hidrodestilación, el que fue analizado por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM). La actividad antifúngica in vitro fue determinada como porcentaje de inhibición sobre el crecimiento de micelio de Botrytis cinerea, determinando la concentración mínima inhibitoria 100% (CMI 100%) aplicando 0, 0.01, 0.025, 0.05, 0.075 y 0.1 μg/mL de aceite esencial/mL. Posteriormente se evaluó el efecto de la CMI 100% sobre la mortalidad de las esporas de B. cinerea durante 7 días de cultivo y en ensayos in vivo sobre frutos de zarzamora (Rubus fruticosus Cv. Tupi) inoculados con 1x106 esporas/mL. En todos los ensayos se utilizó el etanol como vehículo de dilución, que fue probado como control negativo y el fungicida comercial Tecto60 (tiabendazol) como control positivo. Con el análisis de CG-EM se identificaron los compuestos terpénicos β-pineno, β-trans-ocimeno, β-ocimeno, β-linalol, estragol, metil eugenol, β-cariofileno y β-cubebeno. El 75% del aceite esencial está compuesto por los terpenos estragol y metil eugenol con un contenido de 521.8 μg/mL y 464.6 μg/mL, respectivamente. A los 7 días del cultivo in vitro de B. cinerea, la concentración de 0.05 μg/mL fue la más baja que mostró el 100% de inhibición sobre micelio de B. cinerea (CMI 100%), inhibió la germinación de esporas y ejerció un 100% de mortalidad de éstas, y los frutos inoculados no presentaron síntomas de la infección, almacenado tanto a 4 °C como a 25 °C. Para determinar la concentración óptima de quitosano como recubrimiento de frutos de zarzamora Cv. Tupi, se midieron los valores de viscosidad, dureza y deformación de dureza en las biopelículas en tres concentraciones (0.5, 1.0 y 1.5%).