Identificación de Fusarium asociado a Persea americana Miller, variedad drymifolia (Schltdl. y Cham.) S.F. Blake

Abstract

This study is proposed in order to isolate and characterize morphologically and molecularly, and evaluate the pathogenicity of Fusarium spp. Associated to roots of Persea americana Miller, drymifolia variety (Schltdl. And Cham.) S.F. Blake, in Michoacan, Mexico. 10 samples were taken from localities belonging to the avocado strip the state of Michoacan and were obtained 19 isolates of Fusarium spp. The morphological characterization was carried out based on their cultural characteristics on nutrient PDA and growth rate, the microscopic characteristics as microconidia, macroconidia, chlamydospores and coiled hyphae in culture medium CLA was subsequently determined. For molecular characterization, a DNA extraction according to the protocol described by Cenis (1992) was performed, subsequently became a PCR based on primers encoding elongation factor and calmodulin, the fragments obtained were purified and sequenced in Macrogen Inc. These sequences were compared for homology using BLAST analysis and those that showed greater similarity were obtained, total sequences lined up in MEGA 6.0 for finding the best evolutionary model, genetic distances and building cladograms based on maximum parsimony and maximum likelihood. Subsequently the pathogenicity of these strains were evaluated for strain-host interaction tests on avocado plants from the same tree, they were seeded in a sterile substrate based on sand and after three months were inoculated with conidial solutions strains of Fusarium spp. Virulence was evaluated according to the time it took to present the first symptom and severity for damage that occurred in root and apex compared to controls. Morphological and molecular analysis concluded that 15 strains belong to Fusarium oxysporum Schl. And the remaining four to Fusarium solani, Mart. The pathogenetic evaluation found that all of them were pathogenic strains, they showed a virulence which ranged in 16-56 days.

El presente estudio se planteó con el objetivo de aislar, caracterizar morfológicamente y molecularmente, así como evaluar la patogenicidad de Fusarium spp. Asociadas a raíz de Persea americana Miller, variedad drymifolia (Schltdl. Y Cham.) S.F. Blake, en el estado de Michoacán. Se realizaron 10 colectas en localidades pertenecientes a la franja aguacatera del estado de Michoacán y se obtuvieron 19 aislados de Fusarium spp. La caracterización morfológica se realizó en base a sus características culturales en medio de nutritivo PDA y tasa de crecimiento, posteriormente se determinaron las características microscópicas como microconidios, macroconidios, clamidosporas y presencia de hifas enrolladas en medio de cultivo CLA. Para la caracterización molecular se realizó la extracción de ADN de acuerdo al protocolo descrito por Cenis (1992), posteriormente se hizo una PCR con base en los iniciadores que codifican para factor de elongación y calmodulina, los fragmentos obtenidos se purificaron y secuenciaron en Macrogen Inc. Estas secuencias se compararon en homología por medio de análisis BLAST y se obtuvieron aquellas que presentaron mayor similitud, el total de las secuencias se alineó en MEGA 6.0 para la búsqueda del mejor modelo evolutivo, distancias genéticas y la construcción de cladogramas en base a máxima parsimonia y máxima verisimilitud. Posteriormente se evaluó la patogenicidad de estas cepas para determinar la interacción cepa-hospedero en pruebas realizadas en plantas de aguacate provenientes de un mismo árbol, éstas se sembraron en un sustrato estéril a base de arena y después de tres meses se inocularon con soluciones conidiales de las cepas de Fusarium spp. Se evaluó la virulencia de acuerdo al tiempo que tardaron en presentar el primer síntoma, así como la severidad por los daños que produjeron en raíz y ápice en comparación a los testigos. Los análisis morfológicos y moleculares concluyeron que las 15 cepas pertenecen a Fusarium oxysporum Schl.