Diseño de un método de detección y tipificación por PCR de Salmonella enterica en leche

Abstract

Salmonella Typhimurium is one of the serotypes that most frequently affects the human gastrointestinal diseases causing the frequent ingestion of contaminated food. The standard microbiological method for identification of Salmonella spp. in foods requires 4 to 7 days. Other methods have been developed based on Chain Reaction (PCR) that have proven to be fast, reproducible and with a high degree of sensitivity but a specificity comes only at the subspecies level. In a study comparing the genomes of S. Typhimurium LT2, specific primers were designed genus (STM3098) subspecies I (STM4057) and serotype Typhimurium (STM4497), which were tested in pure cultures of reference strains, suggesting that may be employed for the identification of Salmonella, avoiding testing serology. The aim of this study was to design PCR simple and rapid multiplex, with high sensitivity and reproducible for the detection of Salmonella Typhimurium in milk. The study includes the design of PCR assays from DNA extracted from samples of pasteurized milk inoculated with the reference strain S. Typhimurium ATCC 14028 and enriched by 2, 4, 6, 8, 12 and 24 h at 37 ° C, using the primers mentioned above, the sensitivity was assessed by artificial inoculation with different CFU (colony forming units) and the reproducibility was evaluated testing the method designed in pasteurized milk of different brands.

Salmonella serotipo Typhimurium afecta con mayor frecuencia al ser humano provocando enfermedades gastrointestinales por la frecuente ingesta de alimentos contaminados. El método microbiológico estándar para identificación de Salmonella spp. en alimentos requiere de 4 a 7 días. Se han desarrollado otros métodos basados en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) que han demostrado ser rápidos, reproducibles y con un alto grado de sensibilidad pero cuya especificidad llega solo a nivel de subespecie. En un estudio de comparación de genomas de S. Typhimurium LT2, se diseñaron iniciadores específicos de género (STM3098) subespecie I (STM4057) y serotipo Typhimurium (STM4497), los cuales fueron probados en cultivos puros de cepas de referencia, sugiriendo que pueden ser empleados para la identificación de Salmonella, evitando realizar pruebas serológicas. El objetivo del presente estudio fue diseñar ensayos de PCR simple y multiplex que sean rápidos, con alta sensibilidad y reproducibles para la detección de Salmonella Typhimurium en leche. El estudio incluye el diseño de ensayos PCR a partir de ADN extraído de muestras de leche pasteurizada inoculadas con la cepa de referencia S. Typhimurium ATCC 14028 y enriquecidas por 2, 4, 6, 8, 12 y 24h a 37°C, empleando los iniciadores mencionados anteriormente.