Identificación de polimorfismo en genes de virulencia de Staphylococcus aureus asociados a hospederos específicos

Abstract

Strains of Staphylococcus spp. used in this work were obtained from cases of bovine mastitis in dairy backyard systems. Dichotomous data base, in order to determine the biological risk factors and relation of multi-resistance between strains was developed. Restriction polymorphism was analyzed and the statistical association between different allelic profiles and bovine subclinical mastitis, as well as the discrimination index of PCR-RFLP of adhesin genes fnbA, fnbB, clfA and clfB of S. aureus. Four hundred and forty isolates were obtained using salt–mannitol agar (SMA, Bioxon), Staphylococcus-110 agar (S110, Bioxon), CHROMAgar Staph aureus (CSA, BD-BBL) and sheep’s blood agar (SBA, BDBBL). All bacterial isolates were identified by their typical colony morphology in the respective media, by secondary tests (for coagulase and b-haemolysis) and by partial 16S rRNA (rrs) gene sequencing as a gold standard test. SMA was the culture medium that was best for isolating and identifying S. aureus from cases of bovine mastitis followed by S110, CSA and SBA. S. aureus, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. sciuri, S. epidermidis, S. hominis, S. xylosus and SIG were associated as risk factors biological in subclinical bovine mastitis cases. We do not identify mecA gene and mecALGA251 (mecC) gene in strains of S. aureus, however, we detected the presence of the mecA gene in strains of S. hominis, S. xylosus, S. sciuri, S. haemolyticus and SIG. It was evident the presence of a complex of Staphylococcus spp. Related epidemiological and pharmacologically to bovine subclinical mastitis. Analysis of restriction of adhesins of S. aureus, revealed that some cluster adhesins were statistically associated with bovine subclinical mastitis and using PCR-RFLP with a combination of four adhesins, was obtained the maximum value of the discrimination index.

Las cepas de Staphylococcus spp. usadas en este trabajo se obtuvieron de casos de mastitis bovina de sistemas lecheros de traspatio. Se elaboró una base de datos dicotómicos, con la finalidad de determinar los factores de riesgo biológico y relación de multiresistencia entre cepas. Se analizó el polimorfismo de restricción y se estableció la asociación estadística entre los diferentes perfiles alélicos y la mastitis subclínica bovina, así como el índice de discriminación de PCR-RFLP de las adhesinas fnbA, fnbB, clfA, clfB de S. aureus. 440 aislados fueron obtenidos de Agar Sal y Manitol (SMA, Bioxon®), Agar Staphylococcus-110® (S110, Bioxon®), CHROMAgar Staph Aureus® (CSA, BD-BBL) y Agar sangre de carnero (SBA, BD-BBL). Todas las bacterias aisladas fueron identificadas por su morfología colonial típica en el medio respectivo, por pruebas secundarias (coagulasa y β-hemolisis) y por secuenciación parcial del gen del 16S rRNA (rrs) como la prueba de oro. SMA fue el medio de cultivo que mejor aisló e identifico S. aureus en casos de mastitis bovina seguido de S110, CSA y SBA, respectivamente. S. aureus, S. haemolyticus, S. saprophyticus, S. sciuri, S. epidermidis, S. hominis, S. xylosus y Grupo de Staphylococcus intermedius se asociaron como factores de riesgo biológico en casos de mastitis subclínica bovina. No fueron identificados los genes mecA y mecALGA251 (mecC) en cepas de S. aureus, sin embargo, se detectó la presencia del gen mecA en cepas de S. haemolyticus, S. hominis, S. xylosus, S. sciuri y SIG. Fue evidente la presencia de un complejo de Staphylococcus spp. relacionados epidemiológica y farmacológicamente a la mastitis subclínica bovina. El análisis de restricción de adhesinas de S. aureus, reveló que algunos alotipos de adhesinas se asociaron estadísticamente a mastitis subclínica bovina y usando PCR-RFLP con la combinación de cuatro adhesinas, se obtuvo el máximo valor del índice de discriminación.