Efecto de la expresión ectópica y del silenciamiento del elF3f en células de adenocarcinoma pulmonar humano (A549)

Abstract

In the present work we investigated the down and up-regulation of the function of the gene coding for the subunit f of the eukaryotic initiation factor 3 (eIF3f) and evaluated its cellular effect. The eIF3f gene plays an important role in the initiation of translation (Benne y Hershey 1978). We originally found that the transcriptional expression of the common bean (Phaseolus vulgaris) eIF3f gene was related to cell division. Laboratory results showed that expression of the eIF3f bean gene in meristematic tobacco cells TBY-2 is circumscribed to the G2/M transition of the cell cycle, and that it is essential for the progression of the cell cycle. Recent results suggest that eIF3f is a negative regulator of translation and has a role in apoptotic signaling (Shi et al. 2006). Therefore, it was interesting to investigate if deregulation of eIF3f expression had an effect on human cell proliferation. We investigated the effect of ectopic expression and silencing of eIF3f gene on cellular growth of a human lung adenocarcinome (cell line A549) with the objective of gathering evidence that indicated its importance in cell division and its possible use in gene therapy against cancer. We found that in quiescent cultures, arrested in G0 by serum limitation, the levels of expression of eIF3f are lowered, compared to proliferating cultures. To determine the expression profile of human eIF3f gene during the cell cycle, A549 cells were synchronized and samples were taken after arrest release (mitotic index, RNA and protein). Expression profiles of both the mRNA and the protein of human eIF3f showed the same cyclic outline.

El presente trabajo consiste en alterar, a través de su silenciamiento y sobre-expresión, la función del gen eIF3f (subunidad f del factor eucarióntico de iniciación 3) y evaluar su efecto celular. El gen eIF3f forma parte del complejo multiproteico eIF3, el cual tiene una función importante en el inicio de la traducción (Benne y Hershey 1978). Originalmente se observó que la expresión transcripcional del gen eIF3f de frijol (Phaseolus vulgaris) estaba relacionada a la división celular (Llanderl-Mendoza 2003). Resultados del laboratorio mostraron que la expresión del gen eIF3f de frijol en células meristemáticas de tabaco TBY-2 está circunscrita a la transición G2/M del ciclo celular, y que es esencial para la progresión del mismo (Llanderal-Mendoza 2003). Resultados recientes sugieren que es un regulador negativo de la traducción y que tiene una función en la señalización apoptótica (Shi et al. 2006). Por lo anterior, se consideró interesante investigar si cambios en los niveles de expresión del gen eIF3f tiene un efecto sobre la proliferación de células humanas. Se investigó el efecto de la expresión ectópica y del silenciamiento del gen eIF3f sobre el crecimiento de células provenientes de un adenocarcinoma pulmonar de humano (línea celular A549), con el fin de reunir evidencia que indiquen su relevancia en la división celular y su posible uso en terapia génica contra el cáncer. Se encontró que, en cultivos quiescentes, bloqueados en G0 por limitación de suero, los niveles de expresión del gen eIF3f están abatidos, en comparación con cultivos en crecimiento.