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Titel: Caracterización de LiuE de Pseudomonas aeruginosa, una acil-CoA liasa involucrada en el catabolismo de leucina y de terpenos acíclicos
Autor(en): Chávez Avilés, Mauricio Nahuam
Adviser: Campos García, Jesús
Stichwörter: info:eu-repo/classification/cti/6
IIQB-M-2009-0001
Catabolismo
Leucina
Terpenos
Erscheinungsdatum: Jan-2009
Herausgeber: Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo
Zusammenfassung: HMG-CoA lyase (EC 4.1.3.4) catalyzes the breakdown of HMG-CoA into acetyl- CoA and acetoacetate. In the present work the following parameters of HMG-CoA lyase: has a relative molecular mass of 33 kDa under conditions Denaturants and under native conditions was shown as a homodimer with a Relative molecular weight of 79 kDa. LiuE presented two major isoenzymes with isoelectric points of 6.8 and 7.0, showed a pH and an optimum temperature of 7.0 and 37 ° C, respectively. He showed a non-Michaelian behavior of sigmoidal type, Suggesting an allosteric regulation, the kinetic constants for HMG-CoA were: A K 0.5 740 μM, Vmax of 27.3 U / mg protein and a Hill coefficient of 2.3. Finally it was found that Acetyl-CoA is a competitive inhibitor of HMG-CoA Lyase. The enzymes homologous to LiuE are enzymes specific for their substrate, and Show small affinity constants denoting the high affinity for their substrate, Also possess a Michaelian enzymatic behavior. LiuE has a high HMG-CoA affinity constant relative to its bacterial counterpart (P. Mevalonii) suggesting that it might be able to recognize more than one substrate; these The data reinforced the hypothesis that the enzyme LiuE is a bifunctional enzyme that is Capable of recognizing 3-hydroxy-3-isohexenylglutaryl-CoA (HIHG-CoA) and hydrolyzing it. Using coupled reactions using cis-geranyl-CoA carboxylase (AtuC / AtuF) And isohexenyl glutaconyl-CoA hydrate (AtuE), purified and renatured, were Observed a poor consumption of cis-Geranil-CoA (1.59 nmol consumed) to be absent LiuE in the reaction mixture, whereas when added to the reaction, the Cis-geranyl-CoA increased 11-fold (17.82 nmol cis-geranyl-CoA consumed). With The above evidence is collected to suggest that LiuE has participation in the routes catabolic properties of leucine and acyclic terpenes, by the recognition and Fragmentation of the respective metabolic intermediates (3-hydroxy-3- Methylglutaryl-CoA and 3-hydroxy-3-isohexenylglutaryl-CoA).
La HMG-CoA liasa (EC 4.1.3.4) cataliza la ruptura del HMG-CoA en acetil- CoA y acetoacetato. En el presente trabajo se determinaron los siguientes parámetros de la HMG-CoA liasa: posee una masa molecular relativa de 33 kDa en condiciones desnaturalizantes y en condiciones nativas se mostró como un homodímero con una masa molecular relativa de 79 kDa. LiuE presentó dos isoenzimas mayoritarias con puntos isoeléctricos de 6.8 y 7.0, mostró un pH y una temperatura óptima de 7.0 y 37°C, respectivamente. Mostró un comportamiento no Michaeliano de tipo sigmoidal, sugiriendo una regulación alostérica, las constantes cinéticas para el HMG-CoA fueron: una K 0.5 740 μM, Vmáx de 27.3 U/mg proteína y un coeficiente de Hill de 2.3. Finalmente se encontró que el Acetil-CoA es un inhibidor competitivo de la HMG-CoA liasa. Las enzimas homólogas a LiuE son enzimas específicas para su sustrato, y muestran constantes de afinidad pequeñas denotando la gran afinidad por su sustrato, además poseen un comportamiento enzimático Michaeliano. LiuE posee una elevada constante de afinidad por el HMG-CoA con respecto a su homóloga bacteriana (P. mevalonii) sugiriendo que podría ser capaz de reconocer más de un sustrato; estos datos reforzaron la hipótesis de que la enzima LiuE es una enzima bifuncional que es capaz de reconocer al 3-hidroxi-3-isohexenilglutaril-CoA (HIHG-CoA) e hidrolizarlo. Utilizando reacciones acopladas empleando la cis-geranil-CoA carboxilasa (AtuC/AtuF) y la isohexenil glutaconil-CoA hidratasa (AtuE), purificadas y renaturalizadas, se observó un consumo pobre de cis-Geranil-CoA (1.59 nmol consumidos) al estar ausente LiuE en la mezcla de reacción, mientras que al agregarla a la reacción, el consumo del cis-geranil-CoA aumento 11 veces (17.82 nmol de cis-geranil-CoA consumidos). Con lo anterior se recaba evidencia para sugerir que LiuE tiene participación en las rutas catabólicas de la leucina y de los terpenos acíclicos, mediante el reconocimiento y fragmentación de los respectivos intermediarios metabólicos (el 3-hidroxi-3- metilglutaril-CoA y el 3-hidroxi-3-isohexenilglutaril-CoA).
Beschreibung: Instituto de Investigaciones Químico Biológicas. Maestría en Ciencias en Biología Experimental
URI: http://bibliotecavirtual.dgb.umich.mx:8083/xmlui/handle/DGB_UMICH/3847
Enthalten in den Sammlungen:Maestría

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