Efecto del ácido 13-epi-labdanólico de Ageratina jocotepecana B. L. Turner en la formación de catarata en cristalino aislado de conejo

Abstract

A common cause of vision loss is cataracts. In Mexico, 300,000 adults are reported with this condition. One of the metabolic pathways involved in the formation of diabetic cataract (DC) is the polyol pathway. Where, Aldose Reductase (AR) under hyperglycemic conditions (HG,) converts glucose to sorbitol. The accumulates sorbitol inside the cells of the lens and creates an osmotic stress, thus, the cell membrane is smooth and there is loss of sharpness (cataract). Current, effective treatment has been not known to help at the problem. The inhibitory capacity towards the AR enzyme by the consumption of NADPH was determined by spectrophotometric methods. Purified 13-epi-labdanolic acid from the hexanic extract of A. jocotepecana inhibited the AKR1B1 of the rabbit lens with an IC50. The type of inhibition and Ki were determined. In the search for compounds that inhibit DC formation, an in vitro model is needed to evaluate the progression of cataract in an HG environment. An in vitro model for tissue culture was established to evaluate the effect of 13-epi-labdanolic acid in the prevention of diabetic cataract formation, where rabbit lens were cultured in medium 199 with 1% penicillin-streptomycin, 0.5 % fetal serum bovine and 20 mM xylose in CO2: air (5:95 %) environment at 37°C. The rabbit lens were observed every 24 h to analyze their transparency using a Gel Logist 200 Image System and the ImageJ program. The ex vivo model with 20 mM xylose allowed us to obtain an opacity formation (cataract) from day 2 in comparison with the control that allowed to observe clear lens until day 6.

Una causa común de la pérdida de visión es la catarata. En México se reportan 300 mil adultos con esta afección. Una de las vías metabólicas implicadas en la formación de la catarata diabética (CD) es la vía de los polioles. Donde, la Aldosa Reductasa (AR) en condiciones hiperglucémicas (HG) convierte la glucosa a sorbitol. Éste último se acumula dentro de las células del cristalino y crea un estrés osmótico por lo que se lisa la membrana celular y ocurre pérdida de nitidez: catarata. Hasta ahora no se conoce ningún medicamento efectivo que coadyuve a la solución del problema. La capacidad inhibitoria hacia la enzima AR mediante el consumo de NADPH se determinó por métodos espectrofotométricos. El ácido 13-epi-labdanolico purificado del extracto hexánico de A. jocotepecana inhibió a la AKR1B1 del cristalino de conejo con una CI50. Se determinaron el tipo de inhibición y Ki. En la búsqueda de compuestos que inhiban la formación de la CD, se necesita un modelo in vitro para evaluar la progresión de catarata en un entorno HG. Un modelo in vitro para el cultivo de tejido se estableció para evaluar el efecto del ácido 13-epi-labdanólico en la prevención de la formación de catarata, en donde cristalinos de conejo se cultivaron en medio 199 con penicilina-estreptomicina 1 %, suero fetal de bovino 0.5 % y xilosa 20 mM en un entorno de CO2:humedad (5:95, %) a 37ºC. Los cristalinos se observaron cada 24 h para analizar su transparencia mediante un sistema de Imagen Gel Logist 200 y el programa ImageJ. El modelo ex vivo con xilosa 20 mM nos permitió obtener una formación de opacidad (catarata) a partir del día 2 en comparación con el control que permitió observar cristalinos transparentes hasta el día 6.