Producción de la proteína At1g28290 en suspensiones de cultivos celulares de Nicotina tabacum Bright yellow 2 (TBY-2) y en E.coli

Abstract

Modern biotechnology with genetic knowledge, have been applied in various areas of knowledge, as in the improvement of the species in agriculture, by extraction, purification, study, characterization and production of proteins in plants. The production of these recombinant proteins is carried out in biological systems including bacteria suspensions and plant cell culture. The produced protein of interest encoded by the At1g28290 gene (AtAGP31) is conferred on the cells of etiolated hypocotyls of Arabidopsis thaliana cell wall called compartment. In order to perform a preliminary study of the production process of the structure of the complete AtAGP31, as well as incomplete versions in this work different constructs that allow the production of two proteins in suspension cell cultures of Nicotiana Tabacum Bright Yellow was obtained 2 (T-BY2): At1g28290c and At1g28290ps + CAP; and a protein in E. coli; At1g28290PAC. The recombinant protein also contains 6x His tag at C-terminus to allow purification by affinity chromatography, and the V5 epitope whereby recognition is performed by specific antibodies. They have established the initial conditions for protein production in E. coli bacteria which are: 0.002% arabinose induced at 37 ° C for 4h. Stable transformation of TBY-2 clone belonging to 4I.1 At1g28290c / 6His / V5 construction which was verified by inverted fluorescence microscopy was obtained. For construction At1g28290ps + PAC / 6His / V5 1G.1 clone was selected for A. tumefaciens cells for use in the transformation of T-BY2, which is still under development.

La biotecnología moderna junto con los conocimientos genéticos, se han aplicado en diversas áreas del conocimiento, como en el mejoramiento de las especies en la agricultura, mediante la extracción, purificación, estudio, caracterización y obtención de proteínas contenidas en plantas. La producción de estas proteínas recombinantes se realiza en sistemas biológicos como bacterias y suspensiones de cultivos celulares de plantas. La proteína de interés producida codificada por el gen At1g28290 ( AtAGP31) esta conferida a las células de hipocótilos etiolados de Arabidopsis thaliana del compartimiento llamado pared celular. A fin de realizar un estudio preliminar del proceso de producción de la estructura de la AtAGP31 completa, así como también de versiones incompletas, en este trabajo se obtuvieron diferentes construcciones que permiten la producción de dos proteínas en suspensiones de cultivos celulares de Nicotiana Tabacum Bright Yellow 2 (T-BY2): At1g28290c y At1g28290ps+PAC; y una proteína en E. coli; At1g28290PAC. La proteína recombinante contiene además 6x etiquetas de His en C-terminal que permiten la purificación por cromatografía de afinidad, y el epítopo V5 mediante el cual se realiza el reconocimiento por anticuerpos específicos. Se han establecido las condiciones iniciales de producción de la proteína en la bacteria E. coli las cuales son: 0.002% de arabinosa inducida a 37°C por 4h. Se obtuvo la transformación estable de TBY-2 para el clon 4I.1 perteneciente a la construcción At1g28290c/6His/V5 la cual fue verificada por microscopía de fluorescencia invertida. En el caso de la construcción At1g28290ps+PAC/6His/V5, el clon 1G.1 fue seleccionado de las células A. tumefaciens para usarse en la transformación de T-BY2, la cual esta aun en desarrollo.