Estudio de la respuesta inmune adaptativa celular a la infección por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino

Abstract

The Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus (PRRSV) causes a disease of great importance in the swine industry, worldwide. The disease burden is due to the economic losses associated with lower production rates. PRRSV has a single-stranded RNA genome of positive polarity. This virus has a tropism for alveolar macrophages and dendritic cells. The protein encoded by ORF5, called GP5, is closely related to both the evasion of the immune response and the protective immune response. There is a lack of knowledge about the immunodominant T epitopes present in GP5 and their role in the activation/inactivation of the macrophage-mediated protective immune response. The objective of this project was to evaluate the activation of mouse monocytes/macrophages, in an in vitro cell model, in response to the stimulation of three synthetic peptides identified in the GP5 protein of PRRSV, which have been suggested to be probable T epitopes, called GP5T1, GP5T2 and GP5T3. The activation of monocytes was evaluated by scoring the morphological changes at 0, 0.5, 1, 2, 8 h after treatment with each of the peptides independently, using Wright's stain. Furthermore, to investigate the possible participation of the NF-?B signaling pathway in the activation of mouse monocytes/macrophages, we generated the cell line RAW264.7- NF-?B-hrGFP, that constitutively expresses the plasmid pNF-?B- hrGFP that contains the cis-element of the transcription factor NF-?B and that directs the expression of the GFP reporter gene. The cells were stimulated with the three peptides, independently, and the expression of GFP was evaluated at the same times described above.

El Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino, provocado por el virus del mismo nombre (PRRSV) tiene gran importancia a nivel mundial, debido a que provoca pérdidas económicas cuantiosas en la industria porcícola, principalmente porque se asocia a la reducción de los índices productivos. El PRRSV, posee un genoma de ARN de cadena sencilla, de polaridad positiva. Dicho virus tiene un especial tropismo por macrófagos alveolares y células dendríticas. Se ha mostrado que la proteína codificada por el ORF5, llamada GP5, está estrechamente relacionada tanto con la evasión de la respuesta inmune, como con la respuesta inmune protectora. Poco se conoce sobre los epítopos T inmunodominantes presentes en la proteína GP5 y su función en la activación/inactivación de la respuesta inmune protectora mediada por macrófagos. El objetivo de este proyecto fue evaluar la activación de monocitos/macrófagos de ratón, en un modelo celular in vitro, en respuesta al estímulo de tres péptidos sintéticos identificados en la proteína GP5 de PRRSV, los cuales se ha sugerido son probables epítopos T, denominados GP5T1, GP5T2 y GP5T3. Por un lado, se evaluó la activación de los monocitos a través del análisis del cambio morfológico monocito-macrófago durante 0, 0.5, 1, 2, 8h después del tratamiento con cada uno de los péptidos de manera independiente, a través de la Tinción de Wright. Por otro lado, para conocer la posible participación de la vía de señalización NF-?B en la activación de monocitos/macrófagos de ratón, se obtuvo una línea celular (RAW264.7- NF-?B-hrGFP) que expresa de manera constitutiva el plásmido pNF-?B-hrGFP que contiene el elemento cis del factor de transcripción NF-?B y que dirige la expresión de gen reportero GFP. En esta línea celular se realizó el tratamiento con los tres péptidos y se evaluó la expresión del reportero en los mismos tiempos descritos anteriormente.