Especies de ganoderma asociadas a la pudrición de raíz en Persea americana Miller var drymifolia (Schltdl. y Cham) S. F. Blake

Abstract

The present work was proposed with the objective of collecting, isolating, characterizing morphologically and molecularly, as well as determining the severity and virulence of species of the genus, associated with the foot rot and roots of Persea americana Miller, variety drymifolia (Schltdl. And Cham.) SF Blake, in some municipalities and localities of the state of Michoacán in the area known as “Franja Aguacatera”. Various collections were made in the areas with the largest planted area and a total of 30 isolates with sporomas of each one were obtained respectively. The morphological characterization was carried out based on its cultural characteristics in PDA nutrient medium and its morphological characters, both macro and microscopic, described for the genus. For molecular identification, DNA extraction was performed according to the protocol described by Cenis (1992) and Osuji et al., (2015). Subsequently, a PCR was carried out based on the primers that code for ITS (1 and 4) elongation factor (EF-1α) and RPB2, the fragments obtained were purified and sequenced in Macrogen Inc. These sequences were compared in homology by means of BLAST analysis, the total of the sequences will be aligned in MEGA 6.0 for the search for the best evolutionary model, genetic distances and the construction of cladograms based on maximum parsimony and maximum likelihood Later the pathogenicity of these strains was evaluated to determine the interaction strain-host with tests carried out on avocado plants from the same tree, these were sown in a sterile substrate based on sand and after two months they were inoculated with mycelium of the strains of Ganoderma spp. Virulence was evaluated according to the time it took to present the first symptom, as well as the severity of the damage caused to the root and apex compared to the controls.

El presente trabajo se planteó con el objetivo de colectar, aislar, caracterizar morfológica y molecularmente, así como determinar la severidad y virulencia de especies del género Ganoderma, asociadas a la pudrición de tranco y raíces de Persea americana Miller, variedad drymifolia (Schltdl. Y Cham.) S.F. Blake, en municipios y localidades del estado de Michoacán en la zona conocida como “Franja Aguacatera”. Se realizaron diversas recolectas en las zonas con mayor superficie plantada y se obtuvieron un total de 30 aislados con esporomas de cada recolecta respectivamente. La caracterización morfológica se realizó con base en sus características culturales en medio nutritivo PDA y sus caracteres morfológicos tanto macro como microscópicos descritos para el género. Para la identificación molecular se realizó la extracción de ADN de acuerdo al protocolo descrito por Cenis (1992) y Osuji et al. (2015). Posteriormente se llevó a cabo la PCR con base en los iniciadores que codifican para ITS1 e ITS4, factor de elongación (EF-1α) y RPB2, los fragmentos obtenidos se purificaron y secuenciaran en Macrogen Inc. Estas secuencias se compararon en homología por medio de análisis BLAST, el total de las secuencias se alineó en MEGA 6.0 para la búsqueda del mejor modelo evolutivo, distancias genéticas y la construcción de cladogramas con base en la máxima parsimonia y máxima verisimilitud. Posteriormente se evaluó la patogenicidad de las cepas para determinar la interacción fitopatógeno-hospedero, con pruebas realizadas en plantas de aguacate provenientes de un mismo árbol, éstas se sembraron en un sustrato estéril a base de 2:1 suelo tipo andosol/arena, después de dos meses se inocularon con micelio de las cepas de Ganoderma spp. Se evaluó la virulencia de acuerdo al tiempo que tardaron en presentar el primer síntoma, así como la severidad por los daños que produjeron en raíz y ápice caulinar en comparación a los testigos.