Detección molecular de bacterias patógenas abortivas en bovinos

Abstract

Brucellosis, compylobacteriosis and tuberculosis are infectious zoonotic diseases, limiting cattle production in Mexico, the main clinical signs of these diseases are infertility in males, recurrence of estrus and abortions in different stages of the pregnancy of females. Mexico is an area of high prevalence and currently the diagnostic techniques used for these diseases are Rose Bengal, complement fixation, bacterial cultures and ELISA. The objective of the present study was to design and validate the functioning of specific primers or primers for the Brucella abortus, Campylobacter fetus and Mycobacterium tuberculosis species, which can be used in molecular diagnostic methodologies such as PCR, selected molecular reference targets for each bacterium and that do not intercede in the vaccine species of this bacterium. The designed primers amplify short fragments between 120 and 150 base pairs (bp); for which the amplification conditions were standardized considering the size of the fragment, with these results the functionality of the primers in the real-time PCR assays (qPCR) and endpoint PCR for the detection of B. abortus, Campylobacter fetus and Mycobacterium tuberculosis.

La brucelosis, compylobacteriosis y tuberculosis, son enfermedades infecciosas zoonoticas, limitantes de la producción ganadera bovina en México, los principales signos clínicos de estas enfermedades son infertilidad en machos, repetición de celo y abortos en distintas etapas de la gestación de las hembras. México es una zona de alta prevalencia y en la actualidad las técnicas de diagnóstico utilizadas para estas enfermedades son Rosa de Bengala, fijación de complemento, cultivos bacterianos y ELISA. El objetivo del presente estudio fue diseñar y validar el funcionamiento de iniciadores o primers específicos para las especies Brucella abortus, Campylobacter fetus y Mycobacterium tuberculosis, que puedan ser utilizados en metodologías de diagnóstico moleculares como la PCR, seleccionado blancos moleculares de referencia para cada bacteria y que no intercedan en las especies vacúnales de esta bacteria. Los iniciadores diseñados amplifican fragmentos cortos de entre 120 y 150 pares de bases (bp); por lo que las condiciones de amplificación fueron estandarizadas considerando el tamaño del fragmento, con estos resultados se validó la funcionalidad de los primers en los ensayos de PCR tiempo real (qPCR) y PCR punto final para la detección de B. abortus, Campylobacter fetus y Mycobacterium tuberculosis.