This paper reports the in vitro reproduction of mature oocytes, fertilization and embryo development in pigs. The standardization of these reproductive biotechnologies contribute to the ongoing development of assisted reproduction methodologies border as AI, IVF, ICSI, production of transgenic pigs, animal cloning, embryo transfer, among others. The oocytes were collected from ovaries of females from the municipal trail of Morelia, Mich., Which matured in TCM-199 medium supplemented with FSH and LH hormones for 44 h. 10 trials were performed with maturation oocytes about 1500, of which 82 ± 8% completed maturation using as criteria: the distended granulosa cells, homogeneous cytoplasm and dark polar body presence. Oocytes matured in vitro, were cocultured with fresh they spermatozoa (2000 spermatozoa / oocyte) in microdroplets 100l medium tris buffer means (TBM) supplemented with caffeine and fetal bovine serum (BSA) for 6 h. Elapsed time fertilized and washed, oocytes were cultured in embryonic development through NCSU-23 for 48 h. For in vitro fertilization three trials were conducted with a total of 26 mature oocytes of which 77.4 ± 4.3% exhibited the formation of pronuclei, this percentage 20% had polyspermy. For the production of embryos three trials with a total of 80 oocytes, of which 69 ± 6.4% reached different stages of embryonic development were performed. By in vitro fertilization in pigs, can be evaluated in a short time the fertilizing capacity of stallions for breeding, developing storage solutions fresh semen, the use of sperm as vector gene and production of transgenic animals ICSI.
El presente trabajo reporta la producción in vitro de ovocitos maduros, la fertilización y el desarrollo embrionario en cerdos. La estandarización de estas biotecnologías reproductivas contribuyen al desarrollo actual de metodologías de reproducción asistida de frontera como: la IA, la FIV, ICSI, producción de cerdos transgénicos, clonación animal, transferencia de embriones, entre otras. Los ovocitos se colectaron de ovarios de hembras procedentes del rastro municipal de Morelia, Mich., los cuales se maduraron en medio TCM-199 suplementado con las hormonas FSH y LH por 44 h. Se realizaron 10 ensayos de maduración con aproximadamente 1500 ovocitos, de los cuales el 82±8% completaron la maduración, tomando como criterios: la distensión de las células de la granulosa, citoplasma homogéneo, oscuro y presencia del primer corpúsculo polar. Los ovocitos madurados in vitro, fueron cocultivados con espermatozoides frescos (2000 espermatozoides/ovocito) en microgotas de 100μl de medio tris buffer médium (TBM) suplementado con cafeína y suero fetal bovino (BSA) por 6 h. Transcurrido el tiempo los ovocitos fertilizados y lavados, fueron cultivados en medio de desarrollo embrionario NCSU-23 durante 48 h. Para la fertilización in vitro se realizaron 3 ensayos con un total de 26 ovocitos maduros de los cuales el 77.4±4.3% presentaron la formación de pronúcleos, de este porcentaje el 20% presentó polispermia. Para la producción de los embriones se realizaron 3 ensayos con un total de 80 ovocitos, de los cuales el 69±6.4% alcanzaron diferentes etapas del desarrollo embrionario. Mediante la fertilización in vitro en la especie porcina, se podrá evaluar en corto tiempo la capacidad fertilizante de sementales para píe de cría, el desarrollo de soluciones de almacenamiento de semen fresco, el empleo del espermatozoide como vector de genes y la producción de animales transgénicos mediante ICSI.
