Obtención de cepas transgénicas de dos aislados de Trichoderma harzianum que permita el estudio del gen prb1 de Trichoderma atroviride

Abstract

The species of the genus Trichoderma are ascomycetes fungi used as a biological control agent against plant pathogenic fungi. In Trichoderma atroviride the Prb1 protease participates in the lysis of the parasitized fungus since its expression is increased by the presence of this or its cell walls, the overexpression of the prb1 gene gives a greater biocontrol capacity against phytopathogenic fungi. In order to analyze the expression of the prb1 gene in other species of the genus Trichoderma, a plasmid called pUE04 was generated, which contains the gusA reporter gene fused to the regulatory regions of prb1. The T. atroviride species was transformed with this plasmid by polyethylene glycol-CaCl2 method to generate stable transformants with a phenotype similar to the wild type strain. For this, their growth was analyzed in solid and liquid culture media, as well as their mycoparasitic activity. On the other hand two different species of Trichoderma harzianum, T35 and YF were transformed with the plasmid pUE04 by the biobalistic method generating transformants which will allow the analysis of the expression of the prb1 gene through the corresponding reporter gene assay gus

Las especies del género Trichoderma son hongos ascomicetos utilizados como agente de control biológico contra hongos patógenos de plantas. En Trichoderma atroviride la proteasa Prb1 participa en la lisis del hongo parasitado ya que su expresión se ve incrementada por la presencia de este o de las paredes celulares del mismo, la sobre expresión del gen prb1 da una mayor capacidad biocontroladora contra hongos fitopatógenos. Con la finalidad de analizar la expresión del gen prb1 en otras especies del género Trichoderma se generó un plásmido denominado pUE04, el cual contiene el gen reportero gusA fusionado a las regiones regulatorias de prb1. Se transformó a la especie T. atroviride con este plásmido por método de polietilenglicol-CaCl2 para generar transformantes estables con un fenotipo similar a la cepa silvestre. Para esto se analizó su crecimiento en medios de cultivo sólidos y líquidos, así como su actividad micoparasítica. Por otro lado dos especies distintas de Trichoderma harzianum, T35 y YF fueron transformadas con el plásmido pUE04 por el método de biobalística generando transformantes las cuales permitirán el análisis de la expresión del gen prb1 a través del ensayo correspondiente al gen reportero gus.