Aislamiento de ADN y tipificación de Escherichia coli por PCR en aislados bacterianos y heces

Abstract

Escherichia coli colonizes the human gut few hours after birth, considered by it as normal flora. The intention of this work is to present the importance of analysis of Escherichia coli as the predominant bacteria of the normal microflora and demonstrate primarily that molecular PCR assays are an effective and safe option in the establishment of rapid diagnosis compared with methods for years as conventional studies of the genetic composition of bacterial populations they have been forced to rely on culture-based methods; From the foregoing, researchers have explored the use of molecular methods to prevent crop-dependent techniques, one such technique is the polymerase chain reaction (PCR). The enzyme-dependent nucleic acids such as PCR, manipulations are hampered by the presence in the DNA extracted from natural inhibitory substances can not be removed by standard techniques for the purification of DNA; and because feces samples are too complex for direct PCR technique, by the presence of inhibitors that may be inherent co-extracted with clinical bacterial DNA. Proper treatment depends on the efficiency and speed of detection of the causative agent. However, PCR has been used to detect Escherichia coli.

Escherichia coli coloniza el intestino del humano pocas horas luego de su nacimiento, considerándose por ello como flora normal. La intención del presente trabajo, es dar a conocer la importancia del análisis de Escherichia coli como bacteria predominante de la microflora normal así como demostrar principalmente que los ensayos moleculares por PCR constituyen una opción eficaz y segura en el establecimiento de diagnósticos rápidos comparándolos con los métodos convencionales pues por años los estudios de la composición genética de poblaciones bacterianas han estado obligados a depender de métodos basados en cultivos; por lo anterior los investigadores han explorado el uso de métodos moleculares para evitar las técnicas cultivo-dependientes, una de estas técnicas es la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) . Las manipulaciones enzima-dependientes de ácidos nucleicos, tales como PCR, se obstaculizan por la presencia en el ADN extraído de sustancias naturales inhibitorias que no se pueden quitar por las técnicas estándares de la purificación de el ADN; y debido a que las heces son muestras clínicas muy complejas para la técnica de PCR directa, por la presencia de inhibidores inherentes que pueden ser coextraídos con el ADN bacteriano. Un tratamiento adecuado depende de la eficiencia y rapidez de la detección del agente causal. No obstante, PCR se ha empleado para detectar Escherichia coli.