Generación de una fusión transcriptorial para la expresión de la proteína verde fluorescente (GFP) en Staphylococcus aureus

Abstract

Plasmids are extrachromosomal genetic elements of double-stranded, circular, covalently closed, supercoiled DNA (although linear plasmids exist in Borrelia and some Actinomycetes). Plasmids occasionally contain genes that encode products essential for bacterial growth; however, they generally produce molecules that give the bacteria that possess them an adaptive advantage that helps them to face special environmental conditions (Loeza-Laraetal., 2004). There are many examples of genes present in plasmids, whose products include resistance to antibiotics, degradation of complex compounds, production of colicins, enterotoxins, and restriction enzymes (Herveg and Macay, 2004). Plasmids have been used as molecular tools ( vectors) important in Molecular Biology and Genetic Engineering due to the ease with which they are manipulated. An important feature of vectors is that they have reporter genes, whose expression generates a protein that emits an easily detectable signal that indicates whether a cell has been transformed. Both the vectors and the reporter genes have been important in the generation of transcriptional and translational fusions, the first ones have allowed carrying out studies on the expression of proteins of interest under the influence of some specific promoter and the second ones have allowed the intracellular detection of some proteins of interest.

Los plásmidos son elementos genéticos extracromosómicos de ADN de cadenadoble, circulares cerrados covalentemente y superenrollados (aunque enBorrelia y algunos Actinomicetos existen plásmidos lineales).Los plásmidos ocasionalmente contienen genesque codifican productos esenciales para el crecimiento de la bacteria; sin embargo,generalmente producen moléculas que dan a las bacterias que los poseen una ventajaadaptativa que les sirve para enfrentar condiciones ambientales especiales (Loeza-Laraetal.,2004). Existen muchos ejemplos de genes presentes en plásmidos, cuyos productosincluyen desde la resistencia a antibióticos, la degradación de compuestos complejos, hastala producción de colicinas, enterotoxinas y enzimas de restricción (Herveg y Macay,2004).Los plásmidos han sido utilizados como herramientas moleculares (vectores)importantes en la Biología Molecular y la Ingeniería Genética por la facilidad con la que se manipulan. Una característica importante de los vectores es queposeen genes reporteros,cuya expresión genera una proteína que emite una señal fácilmente detectable la cual indica si una célula ha sido transformada. Tanto los vectores como los genes reporteros han sido importantes en la generación de fusiones transcripcionales y traduccionales, las primeras han permitido la realización de estudios de expresión de proteínas de interés bajo la influencia de algún promotor específico y las segundas han permitido la detección intracelular de algunas proteínas de interés.