Determinación de la actividad de la D-aminoácido oxidasa en mitocondrias de cerebro de rata

Abstract

In this work, the activity of the enzyme D-amino acid oxidase (DAAO) in mitochondria from rat brain was studied. Preliminary data suggest oxidation of D-amino acids in mitochondria, so we proceeded to determine the activity of DAAO in the presence of D-amino acids: D-Alanine (D-Ala), D-Serine (D-Ser ), D-methionine (D-Met) and D-aspartic acid (D-Asp). In mitochondria under normal conditions at different times, temperatures, substrate concentrations and at a different pH. The tests were conducted using rats of between 2 and 4 months of age. The results obtained showed that the D-amino acid oxidase has a higher affinity for D-alanine, presenting superior activity with the other D-amino acids studied. This was similar in all variations where the tests were performed. The higher specific activity was found at 10 minutes into the reaction with the four D-amino acids tending all to an increase in 10 min and then a fall. Was also observed behavior that showed D-amino acids at a temperature of 37C, where compared to the temperature of 30, the activity of DAAO decreased with D-alanine, whereas with D-serine, D-methionine and D aspartate showed an increase. While the opposite occurs at 30 ° C. By varying the substrate concentration, it was observed that the increased activity is given at a concentration of 0.1 M D-Ala and D-Asp, while for D-Ser and D-Met increased activity occurs at a concentration of 0.2 M. the lower activity was obtained at a concentration of 0.05 M where D-Asp introduce a faint activity and activity with D-Ser was nil.

En este trabajo se estudió la actividad de la enzima D-aminoácido oxidasa (DAAO) en las mitocondrias de cerebro de rata. Datos preliminares sugieren la oxidación de D-aminoácidos en mitocondrias, por lo que se procedió a la determinación de la actividad de la DAAO en presencia de los D-aminoácidos: D-Alanina (D-Ala), D-Serina (D-Ser), D-Metionina (D-Met) y D-Ácido aspártico (D-Asp). En mitocondrias bajo condiciones normales a distintos tiempos, temperaturas, concentraciones de sustrato y a un pH distinto. Las pruebas que se realizaron empleando ratas de entre 2 y 4 meses de edad. Los resultados que se obtuvieron demostraron que la D-aminoácido oxidasa tiene una mayor afinidad por la D-alanina, presentándose una actividad superior que con los otros D-aminoácidos estudiados. Esto fue similar en todas las variaciones en las cuales se realizaron las pruebas. La mayor actividad específica se encontró a los 10 minutos de iniciada la reacción con los cuatro D-aminoácidos tendiendo todas a un incremento en 10 min y luego una caída. Se pudo observar también el comportamiento que presentaron los D-aminoácidos a una temperatura de 37ºC, donde a comparación con la temperatura de 30ºC, la actividad de la DAAO disminuyó con D-alanina, mientras que con D-serina, D-Metionina y D-Aspartato presentaron un aumento. Mientras que a 30ºC ocurre lo contrario. Al variar la concentración del sustrato, se observó que la mayor actividad se da a una concentración de 0.1 M para D-Ala y D-Asp, mientras que para D-Ser y D-Met la mayor actividad se presenta a una concentración de 0.2 M. La menor actividad se obtuvo a una concentración de 0.05 M en donde el D-Asp presento una actividad apenas perceptible y la actividad con D-Ser fue nula.