Análisis de la expresión del gen srpC de Synechococcus elongatus PCC7942

Abstract

A determining resistance is well studied chromate CHRA membrane protein present in the plasmid pUM505 Pseudomonas aeruginosa. CHRA function is to transport into the cell chromate dependently outer membrane potential. We found many homologs of this protein. Synechococcus elongatus PCC 7942 is a unicellular cyanobacterium that has the plasmid Panl (~ 46 kilobases) in which they have identified genes whose expression is regulated by sulfate levels, including the SRPC gene. SRPC SRPC encoding protein, a homolog of the CHRA CHR superfamily proteins. A mutation in SRPC caused greater resistance to chromate compared to wild-type strain, suggesting that SRPC probably involved in capturing chromate. Subsequently it is shown to confer resistance to chromate SRPC by the expulsion of chromate cytoplasm. The aim of this study is to determine the function of the gene SRPC and evaluate their expression in relation to chromate and sulfate. In strain Escherichia coli W3110 with the gene cloned into the vector pACYC184 a resistance phenotype was seen chromate strain respect to the W3110 strain containing the cosmid 2F10 (containing genes of sulfur metabolism) and sensitive control nourishing broth opposite to what was seen in trials in M9 minimal medium with 0.2 mM sulfate, where he behaved in a similar way that W3110 (2F10) and responsive control. The SRPC gene was cloned in the vector pUCP20 and the recombinant plasmid was transferred into E. coli W3110 and P. aeruginosa PAO1.

Un determinante de la resistencia a cromato muy bien estudiado es la proteína de membrana ChrA presente en el plásmido pUM505 de Pseudomonas aeruginosa. La función de ChrA consiste en transportar el cromato hacia el exterior celular en forma dependiente del potencial de membrana. Se han encontrado numerosos homólogos de esta proteína. Synechococcus elongatus PCC 7942 es una cianobacteria unicelular que posee el plásmido pANL (~46 kilobases) en el cual se han identificado genes cuya expresión es regulada por los niveles de sulfato, entre ellos el gen srpC. srpC codifica la proteína SrpC, un homólogo de las proteínas ChrA de la superfamilia CHR. Una mutación en srpC ocasionó mayor resistencia a cromato comparada con la cepa silvestre, sugiriendo que SrpC probablemente participe en la captación de cromato. Posteriormente se demostró que SrpC confiere resistencia a cromato por medio de la expulsión del cromato del citoplasma. El objetivo de este trabajo es determinar la función del gen srpC y evaluar su expresión en relación con cromato y sulfato. En la cepa W3110 de Escherichia coli con el gen clonado en el vector pACYC184 se vio un fenotipo de resistencia a cromato de la cepa respecto a la cepa W3110 que contiene el cósmido 2F10 (que contiene genes del metabolismo de azufre) y el control sensible en caldo nutritivo, opuesto a lo que se vio en ensayos en medio mínimo M9 con 0.2 mM sulfato, donde se comportó de manera similar que a W3110(2F10) y al control sensible. El gen srpC fue clonado en el vector pUCP20 y el plásmido recombinante fue transferido a E. coli W3110 y P. aeruginosa PAO1.