Aplicación de técnicas moleculares para la identificación del SNP A644G de MAO b en una población control

Abstract

Monoamine oxidase is a mitochondrial outer membrane-bound flavoprotein of oxygen-oxydoreductase type that catalyzes the oxidative deamination of xenobiotic and biogenic neurotransmitter amines to respective aldehydes. Since its discovery in 1928, monoamine oxidase and its isoenzymes A and B have been targets for a variety of studies, either to elucidate its biochemical and pharmacological profile, or to associating with the most common humans psychiatric and neurodegenerative disorders from genetic perspective, that is to say, through the study of the most significance polymorphisms in the MAO A and MAO B genes. Advances in this last line of research respect to monoamine oxidase propose to the polymorphisms uVNTR of 1 and 3 repetitions of MAO A and SNP A644G of MAO B as molecular markers for associating with psychiatric disorders. Genotyping of polymorphisms and point mutations by means of molecular-genetic techniques allows determining the allelic variant of the MAO B gen that prevails in a control population, generating specific genetic databases of that population. In the present work was carried out the A644G SNP analysis by means of amplification of the boundary sequence from intron 13 and exon 14 of the MAO B gene by PCR endpoint from oral epithelium cells of 30 control subjects (15 males and 15 females). A644G SNP genotyping was performed by means of Allele-specific PCR and analysis by Sanger sequencing. The results was showed that over 96% of sample correspond to the “A” allele of MAO B gene by means of AS-PCR, whereas by Sanger sequencing 100% corresponds to “A” allele of the same gene.

La monoamino oxidasa es una flavoproteína unida a la membrana mitocondrial externa de tipo oxigeno oxidoreductasa que cataliza la desaminación oxidativa de aminas neurotransmisoras biogénicas y xenobióticas a sus aldehídos correspondientes. Desde su descubrimiento en 1928, la monoamino oxidasa y sus isoenzimas A y B han sido dianas de una amplia variedad de estudios, ya sea para dilucidar su perfil bioquímico y farmacológico, o para asociarse con los trastornos psiquiátricos y neurodegenerativos más frecuentes en seres humanos desde una perspectiva genética, es decir, a través del estudio de los polimorfismos más significativos en los genes MAO A y MAO B. Los avances en esta última línea de investigación respecto a la monoamino oxidasa proponen a los polimorfismos uVNTR de 1 y 3 repeticiones de MAO A y al SNP A644G de MAO B como marcadores moleculares para asociación con trastornos psiquiátricos. La genotipificación de polimorfismos y mutaciones puntuales por medio de técnicas genético-moleculares permite determinar las variante alélica del gen MAO B que prevalece en una población control, generando bases de datos genéticos específicas de esa población. En el presente trabajo se llevó a cabo el análisis del SNP A644G por mediante amplificación de la secuencia límite del intrón 13 y el exón 14 del gen MAO B por PCR punto final a partir de células extraídas del epitelio bucal de 30 individuos control (15 masculinos y 15 femeninos). La genotipificación del SNP A644G se realizó por medio de PCR alelo específico y análisis por secuenciación de Sanger. Los resultados mostraron que más del 96% de las muestras corresponden con el alelo A del gen MAO B por medio de AS-PCR, mientras que por secuenciación de Sanger el 100% corresponden con el alelo A del mismo gen.