Estandarización de la citometría de flujo para el estudio de líquido cefalorraquídeo en pacientes con leucemia

Abstract

Leukemia is a progressive neoplastic disease of the hematopoietic system. Leukemic infiltration of the Central Nervous System (CNS) represents a poor prognostic factor in the evolution of the disease. Studies suggest that CSF cytology has limitations in identifying neoplastic cells. The aim of this study was to establish the conditions of flow cytometry to identify normal cells in cerebrospinal fluid of patients with leukemia. 31 CSF samples of adult and pediatric patients with leukemia were included, which were placed in cell culture medium and processed for cytometric analysis. Results: Of the 31 cases, three (9.7%) were adults and 28 (90.3%) pediatric. Pediatric samples were analyzed by cytology and 3 cases (10.7%) were found with infiltration and differential counts coincided with the presence of blasts by Wright staining. The CSF sample obtained directly in tube with RPMI 1640 containing 5% human serum, preserve the morphological characteristics of the cells. During Immunostaining process, the addition of 5% albumin and red cell lysis solution, showed better cell characteristics during acquisition, less unspecificity, more viable cells and defined cell populations. Conclusions: The use of RPMI 1640 preserved cell characteristics and increased cell viability sufficient time for analysis.

La leucemia es una enfermedad neoplásica progresiva del sistema hematopoyético. La infiltración leucémica al Sistema Nervioso Central (SNC) representa un factor de mal pronóstico en la evolución de la enfermedad. Estudios sugieren que la citología del LCR presenta limitantes en la identificación de células neoplásicas. El objetivo del presente estudio fue establecer las condiciones de citometría de flujo para identificar las células normales en líquido cefalorraquídeo de pacientes con leucemia. Se incluyeron 31 muestras de LCR de pacientes adultos y pediátricos con leucemia, los cuales se colocaron en medio de cultivo celular y se procesaron para su análisis por citometría de Resultados: De los 31 casos 3 (9.7%) correspondieron a población adulta y 28 (90.3%) a pediátricos. Las muestras pediátricas se analizaron por citología y se encontraron 3 casos (10.7%) con infiltración y la cuenta diferencial coincidió con la presencia de blastos por tinción de Wright. La muestra de LCR obtenida directamente al tubo que contenía RPMI 1640 al 5% suero humano, fue en la que conservó mejor las características morfológicas de las células. Durante el proceso de inmunotinción, la adición de albúmina al 5% y solución de lisis de glóbulos rojos, presentó mejores características celulares durante la adquisición, menor inespecificidad, mayor cantidad de células viables y poblaciones celulares definidas. Conclusiones: el uso de medio de cultivo RPMI 1640 preservó las características celulares y aumentó el tiempo de viabilidad celular suficiente para su análisis.