Separación de la fracción lisosomal de una línea de células tubulares proximales en cultivo y su caracterización

Abstract

The frequency of chronic kidney disease secondary to diabetes mellitus shows increasing trends. Lysosomes are the primary catabolic compartments of eukaryotic cells. They decompose extracellular material that has been sequestered by endocytosis and intracellular components through autophagy. A powerful approach to understanding the multiplicity of activities carried out by living cells is to fractionate the cell into its subcellular components. In the present work, we propose a method of cell fractionation in cultures of proximal tubular cells to obtain a lysosomal fraction which has been characterized through two of its most important enzymes (acid phosphatase and cathepsin B) and a marker of renal damage, NAGase (N-acetyl--D-glucosaminidase). The data show that the method has been effective until this point of the investigation. The enzymatic activity of the acid phosphatase in each of the fractions shows that the fraction obtained has been rich in the organelles since the enzyme has the highest activity in the fraction that we call “filtrate”, and that the enzymatic action of the rest of the fractions is just the free activity produced by the adhesion of the enzyme to the mitochondria and some organelles.

La frecuencia de la enfermedad renal crónica secundaria a diabetes mellitus muestra tendencias crecientes. Los lisosomas son los compartimientos catabólicos primarios de las células eucariotas. Descomponen material extracelular que han sido secuestrados por endocitosis y componentes intracelulares a través de la autofagia. Un enfoque poderoso para entender la multiplicidad de las actividades llevadas a cabo por las células vivas es fraccionar la célula en sus componentes subcelulares. En el presente trabajo se propone un método de fraccionamiento celular en cultivos de células tubulares proximales para obtener una fracción lisosomal la cual ha sido caracterizada a través de dos de sus enzimas más importantes (fosfatasa ácida y catepsina B) y un marcador de daño renal, NAGasa (N-acetil--D-glucosaminidasa). Los datos arrojados señalan que el método ha sido efectivo hasta este punto de la investigación. La actividad enzimática de la fosfatasa ácida en cada una de las fracciones deja ver que efectivamente la fracción obtenida ha sido rica en estos organelos al tener la mayor actividad de esta enzima en la fracción que llamamos “filtrado”, y que la acción enzimática del resto de las fracciones es sólo la actividad libre producida por la adhesión de la enzima a las mitocondrias y algunos otros organelos.