Determinación y caracterización de los compuestos con actividad inhibitoria de la lipasa pancreática presentes en las hojas de Hibiscus rosa-sinensis

Abstract

Introduction. Overweight and obesity in the Mexican population increases year after year, being treated with orlistat, a drug that inhibits the activity of pancreatic lipase, a key enzyme in the assimilation of dietary lipids. Orlistat cannot be used for a long period because of its side effects. The objective of the present work was the isolation and characterization of the pancreatic lipase inhibitory compound(s) present in Hibiscus rosa-sinensis leaf extract. Methods. Ethanol, ethyl acetate, and hexane extracts of the dried leaves of H. rosa-sinensis in a 1:10 (w/v) ratio, were tested in vitro for pancreatic lipase inhibitory activity. Then, TLC and column chromatography were performed of the extract with the highest inhibitory activity. Each of the fractions obtained was again subjected to the in vitro inhibitory test and analyzed by gas chromatography coupled to mass to determine the compounds present in them. The highest anti-lipase activity fraction was chromatographed in column using a gradient of hexane-ethyl acetate (6:4) to yield nine fractions (F1 -F9). Subsequently, the F5 subfraction that presented the highest percentage of lipase inhibition was subjected to GC/MS analysis. Finally, the oral lipid tolerance test was carried out in a murine model with eight groups, all supplied with a lipid emulsion, where group 1 was given only the emulsion; group 2, emulsion + orlistat at 50mg/kg of weight; groups 3, 4 and 5 the emulsion + F5 at 50, 25 and 12.5 mg/kg of weight; and groups 6, 7 and 8 emulsions with the hexane extract at the same doses.

Introducción. El sobrepeso y la obesidad en la población mexicana se incrementa año con año, siendo tratados con orlistat, un fármaco que inhibe la actividad de la lipasa pancreática, enzima clave en la asimilación de los lípidos dietarios. Sin embargo, presenta efectos secundarios, por esto, es de uso restringido. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue el aislamiento y la caracterización del compuesto o compuestos inhibitorios de la lipasa pancreática que están presentes en el extracto de hoja de Hibiscus rosa-sinensis. Métodos. Se obtuvieron tres extractos en etanol, acetato de etilo y hexano de las hojas secas de H. rosa-sinensis en una relación 1:10 (p/v). Cada uno se sometió a la prueba in vitro de la actividad inhibitoria de la lipasa. Después, se realizaron TLC y cromatografía en columna del extracto que tuviera la mayor actividad inhibitoria. A cada una de las fracciones obtenidas se les realizó nuevamente la prueba inhibitoria in vitro y se analizaron por cromatografía de gases acoplada a masas para conocer los compuestos presentes en ellas. De la fracción que presentó el mayor porcentaje de inhibición se sometió a TLC analítica y preparativa para separarla en sub-fracciones y a cada una de ellas se sometieron nuevamente a la prueba de la lipasa in vitro. Posteriormente se llevaron a análisis por CG/EM la sub-fracción de la F5 que presentó mayor porcentaje de inhibición de la lipasa. Finalmente, se llevó a cabo la administración en un modelo murino de ocho grupos, todos suministrados con una emulsión lipídica, donde el grupo 1 solo se le dio la emulsión; el 2, emulsión + orlistat a 50mg/kg de peso; el 3, 4 y 5 la emulsión + F5 a 50, 25 y 12.5 mg/kg de peso; y el 6, 7 y 8 emulsión y a las mismas dosis, pero del extracto hexánico.