The functions of different types of cells that constitute a multicellular organism are regulated by signal transduction pathways, whose final goal is target genes regulation. The Notch signaling pathway is mainly involved in early and late embryo development, and recently, has been described its participation in the adult organism proper function. Hairless, a protein member of the Notch signaling pathway, modulates negatively this transduction signal pathway. Despite efforts to detect Hairless in higher animals, it has not been able to identify a homologue protein. The identification of a homologue protein is essential for the understanding of the regulatory processes during embryo development and other pathological processes where Notch pathway is involved. The Hairless counterparts described in insects have at least three highly conserved domains, where the suppressor of Hairless binding domain is the most conserved. Using analysis in silico and molecular biology techniques was identified and delimited a potentially immunogenic peptide from the Suppressor of Hairless binding domain of Hairless protein from Drosophila melanogaster. This peptide was used as antigen to generate polyclonal antibodies in rabbits and chickens. The sera were tested against total protein extract from embryos of the fruitfly.
La vía de señalización Notch es una de las rutas de comunicación celular, que se utiliza principalmente durante el desarrollo temprano de los individuos, ya que participa en la diferenciación celular y por lo tanto en la organogénesis, y en conjunto con otras vías de transducción de señales, permite las complejas organizaciones espacio-temporales que orquestan y diseñan a los organismos multicelulares. La proteína Hairless es el principal regulador negativo de esta vía y por lo tanto funciona como un antagonista de la misma. Si bien ha sido caracterizada en Drosophila melanogaster y otros insectos, esta proteína de vital importancia para la vía, no cuenta con un homólogo reportado en mamíferos. Hairless cuenta con varios dominios conservados entre los diferentes homólogos conocidos en insectos y uno de estos dominios en particular, le sirve como sitio de enlace a Supresor de Hairless, factor transcripcional de la vía, que cuenta con un homólogo en mamíferos, CBF-1 (RBPJκ). Mediante PCR se amplificó el dominio de unión a Supresor a Hairless de la proteína Hairless de Drosophila melanogaster para producir un péptido in vitro que se usó como antígeno en la inmunización de conejos y gallinas y producir anticuerpos policlonales contra esta región. Posteriormente los sueros se probaron en proteína total de Drosophila melanogaster para detectar Hairless mediante Western Blot. Estos anticuerpos serán probados en proteína total de mamífero con la intención de identificar alguna proteína que conserve la función de Hairless de Drosophila melanogaster o se una a los homólogos de Supresor de Hairless conocidos en estas especies.
