Expresión del péptido E3 de aguacate (Persea americana var. Drymifolia) en células endoteliales bovinas y evaluación de su actividad antimicrobiana

Abstract

The selection of multiresistant microorganisms to conventional antibiotics is a major problem worldwide health, this has led to the search for new control strategies. One are the antimicrobial peptides (PA) which are molecules of defense of plants and animals. The PA most studied plants have been defensins, which have antibacterial and antifungal properties. However, in the Creole avocado (Persea americana var. Drymifolia), which is used in traditional medicine to kill microorganisms and parasites, have not been described PA. From a cDNA library mesocarp of the fruit and seed of this variety of avocado sequences they were identified whose predicted proteins have high homology with PA, including the E3 peptide. In this paper, the cDNA was expressed E3 peptide in bovine endothelial cells and their antimicrobial activity was evaluated. For this, the peptide E3 cDNA was cloned into the vector pTracer- EF / V5-His A generating pTracerE3 construction, which was used to transfect an immortal cell line bovine endothelial (BVE-E6E7). a polyclonal population was obtained and her 9 monoclonal populations were selected. mRNA expression E3 peptide in transfected cells by RT-PCR and sequencing verified. Conditioned medium (CM) of the clones obtained, total protein was quantified and its activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Candida albicans through MTT assay was evaluated. The clones had similar antimicrobial effects and this was concentration dependent (0-100 ug / ml), growth inhibitions of 91.1% and 85.6% against E. coli and S. aureus, respectively, were obtained. However, under the conditions evaluated in this work no activity against Candida albicans MC was detected.

La selección de microorganismos multirresistentes a los antibióticos convencionales es un problema de salud importante a nivel mundial, esto ha conducido a la búsqueda de nuevas estrategias de control. Una de ellas son los péptidos antimicrobianos (PA) que son moléculas de defensa de plantas y animales. Los PA de plantas más estudiados han sido las defensinas, las cuales poseen propiedades antibacterianas y antifúngicas. Sin embargo, en el aguacate criollo (Persea americana var. drymifolia), el cual es utilizado en la medicina tradicional para eliminar microorganismos y parásitos, no se han descrito PA. A partir de un banco de ADNc del mesocarpo del fruto y semilla de esta variedad de aguacate se identificaron secuencias cuyas proteínas predichas tienen alta homología con PA, entre ellas el péptido E3. En este trabajo, el ADNc del péptido E3 se expresó en células endoteliales bovinas y se evaluó su actividad antimicrobiana. Para ello, el ADNc del péptido E3 se clonó en el vector pTracer- EF/V5-His A generando la construcción pTracerE3, la cual se utilizó para transfectar una línea inmortal de células endoteliales bovinas (BVE-E6E7). Se obtuvo una población policlonal y de ella se seleccionaron 9 poblaciones monoclonales. Se verificó la expresión del ARNm del péptido E3 en las células transfectadas mediante RT-PCR y secuenciación. Se obtuvo el medio condicionado (MC) de las clonas, se cuantificó la proteína total y se evaluó su actividad contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Candida albicans a través del ensayo de MTT. Las clonas tuvieron efectos antimicrobianos similares y este fue dependiente de la concentración (0-100 μg/ml), se obtuvieron inhibiciones de crecimiento de 85.6% y 91.1% contra E. coli y S. aureus, respectivamente. Sin embargo, bajo las condiciones evaluadas en este trabajo no se detectó actividad de los MC contra Candida albicans..