Proliferación y diferenciación de células mesenquimales in vitro mediante activación plaquetaria bajo condiciones controladas

Abstract

INTRODUCTION. Platelet-rich plasma (PRP) has been widely incorporated into various clinical areas. Its use is based on the high concentration of growth factors present in platelets, which actively participate in tissue healing and regeneration processes. Although some clinical studies report positive effects of PRP, the evidence is contradictory, and in certain cases, limited benefits or adverse effects are observed. This requires more cautious use, as its mechanisms of action are not yet fully understood. In addition, the lack of research on its interaction with different cell types makes it difficult to understand its biological effect. Therefore, in vitro studies are key to analyzing its cellular influence and improving its clinical application with greater safety. OBJECTIVE. To evaluate the stimulation exerted by PRP on mesenchymal cells in a proliferative state and in the process of differentiation. MATERIALS AND METHODS. Different in vitro assays were carried out with mesenchymal cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) to evaluate their response under varying exposure conditions. The osteogenic capacity of MSCs was analyzed by staining with Pricosirius Red for type I collagen, and the gene expression of cbfa1 and osteopontin by RT-PCR. At the same time, platelet activation and aggregation induced by platelet agonists (ADP, epinephrine, collagen, 2% calcium chloride, and 10% calcium gluconate) was analyzed by detecting surface markers: CD41, GPIIb/IIIa, and P-selectin, selecting two for the following tests. With these, the effects of activated PRP on CM in proliferative and differentiation media were studied, evaluating viability by staining with BrEt/NA. Finally, inflammatory (IL-6, IL-8) and thrombotic (PAI-1, D-dimer, tPA) activity was evaluated in the supernatants of in vitro CM cultures in a proliferative and differentiated state under the stimulus of activated and unactivated platelets by immunoassay.

INTRODUCCIÓN. El plasma rico en plaquetas (PRP) ha sido ampliamente incorporado en diversas áreas clínicas. Su uso se basa en la alta concentración de factores de crecimiento presentes en las plaquetas, los cuales participan activamente en los procesos de cicatrización y regeneración tisular. Aunque algunos estudios clínicos reportan efectos positivos del PRP, la evidencia es contradictoria y en ciertos casos se observan beneficios limitados o efectos adversos. Esto exige un uso más cauteloso, ya que sus mecanismos de acción aún no se comprenden totalmente. Además, la escasez de investigaciones sobre su interacción con distintos tipos celulares dificulta entender su efecto biológico. Por ello, los estudios in vitro son clave para analizar su influencia celular y mejorar su aplicación clínica con mayor seguridad. OBJETIVO. Evaluar el estímulo que ejerce el PRP sobre las células mesenquimales en estado proliferativo y en proceso de diferenciación. MATERIAL Y MÉTODOS. Se llevaron a cabo cuatro tipos de ensayos in vitro con células mesenquimales (CM) y plasma rico en plaquetas (PRP) para evaluar su respuesta en condiciones de exposición variadas. Se analizó la capacidad osteogénica de las CM mediante tinción con Pricosirius Red para colágeno tipo I, y la expresión génica de cbfa1 y osteopontina por RT-PCR. Paralelamente, se analizaron la activación y agregación plaquetaria inducidas por agonistas plaquetarios (ADP, epinefrina, colágeno, cloruro de calcio al 2% y gluconato de calcio al 10%) mediante detección de marcadores de superficie: CD41, GPIIb/IIIa y P-selectina, seleccionándose dos para los siguientes ensayos. Con estos, se estudiaron los efectos del PRP activado sobre CM en medio proliferativo y de diferenciación, evaluando la viabilidad por tinción con BrEt/NA. Finalmente, se evaluó la actividad inflamatoria (IL-6, IL-8) y trombótica (PAI-1, Dímero-D, tPA) en los sobrenadantes de cultivos in vitro de CM en estado proliferativo y diferenciado bajo el estímulo de plaquetas activadas y sin activar mediante inmunoensayo.