Inmunización in vitro de células dendríticas de pollo para la producción de anticuerpos

Abstract

The antibodies have contributed to the development of basic and applied research, diagnosis and therapy of various types of diseases. There are difficulties in the generation of specific Abs against certain antigens including those produced in small quantities, have high toxicity and homology with the host and the unavailability of pure antigen. As an alternative to this problem, in vitro, immunization has some advantages such as: requirement of low amounts of antigen and is not subject to the animal to toxic adjuvants. It is known that in vitro antibodies have a low affinity compared with antobodies generated in vivo immunization, however, it is possible to increase the antigen-antibodie affinity by obtaining mutants once known sequence antibodie. This work, raised stimulate B lymphocytes by dendritic cells (DCs) to generate antibodies specific of antigen. To determine the nature of the DCs and the possible application of these, as a model for in vitro immunization, the following aspects were evaluated : i) Differentiation of DCs from chicken bone marrow using the IL4 and GM-CSF cytokines; ii) Maturation of DCs with Ags different nature; iii) characterization of morphological and metabolic DCs by analysis; iv) Identification of markers of immature and mature DCs such as transcription factor zBTB46, MHC-II and costimulatory molecules CD40 lymphoid cells, CD80 and CD86. After determining the nature of culture DCs capacity of B cells was evaluated to generate Abs against specific Ags conducting a co-culture with DCs mononuclear peripheral blood cells (PBMCs) and specific IgY was detected.

Los anticuerpos (Abs) han contribuido al desarrollo de la investigación básica y aplicada, diagnóstico y terapia de diversos tipos de enfermedades. Existen dificultades para la generación de Abs específicos contra ciertos antígenos (Ags) que incluyen los que se producen en pequeñas cantidades, tienen alta toxicidad y homología con el hospedero y la poca disponibilidad del Ag puro. Como alternativa a dicho problema, la inmunización in vitro, tiene algunas ventajas tales como: requerimiento de bajas cantidades de Ag y no se somete al animal a adyuvantes tóxicos. Se sabe que los Abs obtenidos in vitro tienen una baja afinidad comparados con los Abs generados en la inmunización in vivo, sin embargo, es posible aumentar la afinidad Ag-Ab mediante la obtención de mutantes una vez conocida la secuencia del Ab. El presente trabajo, planteó estimular los linfocitos B por las células dendríticas (DCs) para generar Abs específicos de Ag. Para determinar la naturaleza de las DCs y la posible aplicación de estas, como un modelo para inmunización in vitro, se evaluaron los siguientes aspectos: i) Diferenciación de las DCs a partir de médula ósea de pollo empleando las citocinas IL4 y GM-CSF; ii) Maduración de las DCs con Ags de diferente naturaleza; iii) Caracterización de las DCs mediante análisis morfológico y metabólico; iv) Identificación de marcadores de DCs inmaduras y maduras tales como, el factor de transcripción zBTB46, MHC-II y moléculas coestimuladoras de células linfoides CD40, CD80 y CD86. Una vez determinada la naturaleza del cultivo de DCs se evaluó la capacidad de los linfocitos B para generar Abs específicos contra Ags realizando un co-cultivo de DCs con células mononucleares de sangre periférica (PMBCs) y se detectó la IgY específica.