Desarrollo de un RT-PCR multiplex para el diagnóstico de leucemias linfoblásticas agudas de tipo B (LLA-B) basado en metodología Taguchi

Abstract

B acute lymphoblastic leukemia is a neoplasm characterized by recurrent chromosomal abnormalities including aneuploidy and translocations, which are used as molecular markers for classification (World Health Organization). Translocations related to this neoplasm include the t (1, 19) E2A-PBX1, t (4, 11) MLL-AF4, t (9; 22) BCR-ABL 1 and t (12; 21) TEL-AML 1, each of which has a value in the diagnosis, prognosis and treatment of disease. Identifying fusion transcripts generated by these translocations is performed by chain reaction (PCR) coupled with a reverse transcription (RT). Variables affecting a PCR reaction are different, so that the standardization of diagnostic testing requires the use of methods applied to experimental design. Taguchi's methodology is an alternative that is based on the use of orthogonal arrangements which allow to evaluate the influence of each of the variables in order to obtain optimum conditions of the test.

La leucemia linfoblástica aguda de tipo B es una neoplasia caracterizada por alteraciones cromosómicas recurrentes que incluyen aneuploidías y translocaciones, las cuales son utilizadas como marcadores moleculares para su clasificación (Organización Mundial de la Salud). Las translocaciones relacionadas a esta neoplasia incluyen a la t(1;19) E2A-PBX1, t(4;11) MLL-AF4, t(9;22) BCR-ABL1 y t(12;21) TEL-AML1, cada una de las cuales tiene un valor en el diagnóstico, pronóstico y tratamiento de la enfermedad. La identificación de los transcritos de fusión generados por dichas translocaciones se lleva a cabo mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) acoplada a una transcripción reversa (RT). Las variables que afectan una reacción de PCR son diversas, por lo que la estandarización de una prueba diagnóstica requiere el empleo de metodologías aplicadas al diseño de experimentos. La metodología Taguchi es una alternativa que se basa en el empleo de arreglos ortogonales los cuales permiten valorar la influencia de cada una de las variables con la finalidad de obtener las condiciones óptimas del ensayo.