Discoid and anucleate cells, platelets have traditionally been associated with the processes of haemostasis and thrombosis; however, its involvement in other biological processes has recently been described including the immune response against viruses. Dengue (DENV) and Zika (ZIKV) are arboviruses that have a genome that encodes 3 structural and 7 non-structural proteins. Non-structural protein 1 (NS1) is mainly involved in the replication of viral genetic material. NS1 can also be secreted by infected cells and their circulating presence has been associated with the evasion of the immune response against these viruses. Objective: Study platelet reactivity in response to stimulus with the NS1 protein of dengue and Zika virus. Materials and methods: Blood sample was obtained by venepuncture with Vacutainer system® volunteers who agree to participate in the protocol and meet the criteria of inclusion. Determination of the serological status of NS1 samples of dengue and Zika using ELISA method. Obtention of platelet-rich plasma (PRP) 1000, and platelet-poor-plasma (PPP). Determination of platelet stimulus conditions by flow cytometry (CytoFLEX, Beckman Coulter®). Standardization of atomic force microscopy (AFM) and quartz crystal microbalance (QCM) for further evaluation of post-stimulus cell reactivity with NS1 protein. NT-MDT microscope® NTEGRA and a QCMopen, Novaetech® microbalance was used. Results: The seronegativeness of the 3 working samples was confirmed. The increased expression of markers P-Selectin and GP aIIßI by flow cytometry were observed at 60 min with a protein concentration of 2.5 μg/mL and this was higher when compared to known agonists of activation (ADP, collagen and epinephrine), and the basal expression in inactive platelets. We determined PRP/Buffered Tyrodes onto glass surface for the assessment of platelet by AFM.
Células discoides y anucleadas, las plaquetas han estado asociadas tradicionalmente a los procesos de hemostasia y trombosis; sin embargo, recientemente se ha descrito su participación en otros procesos biológicos incluida la respuesta inmunológica contra virus. El dengue (DENV) y el Zika (ZIKV) son arbovirus que poseen un genoma que codifica 3 proteínas estructurales y 7 no estructurales. La proteína no estructural 1 (NS1) participa principalmente en la replicación del material genético viral. NS1 puede también ser secretada por células infectadas y su presencia en circulación se ha asociado a la evasión de la respuesta inmune contra estos virus. Objetivo: Estudiar la reactividad plaquetaria en respuesta a estímulo con la proteína NS1 del virus de dengue y Zika. Materiales y métodos: Obtención de muestra sanguínea por venopunción con sistema Vacutainer® de voluntarios que acepten participar en el protocolo y cumplan con los criterios de inclusión. Determinación del estado serológico de las muestras contra NS1 de dengue y Zika mediante ELISA. Obtención de plasma rico en plaquetas (PRP) y de plasma pobre en plaquetas (PPP). Determinación de las condiciones de estímulo plaquetario mediante citometría de flujo (CytoFLEX, Beckman Coulter®). Estandarización de microscopia de fuerza atómica (AFM) y microbalanza de cristal de cuarzo (QCM) para posterior evaluación de la reactividad celular posterior a estímulo con proteína NS1. Se utilizó un microscopio NT-MDT® NTEGRA y una microbalanza QCMopen, Novaetech®. Resultados: Se confirmó la seronegatividad de las 3 muestras de trabajo. La mayor expresión de los marcadores P-Selectina y GP αIIβI por citometría de flujo se observaron a los 60 minutos con una concentración de proteína de 2.5 μg/mL y que esta fue mayor al compararse con ADP, colágeno y epinefrina y la expresión basal en plaquetas inactivas. Se determinó PRP/Buffer Tyrodes sobre superficie de vidrio para la evaluación de plaquetas mediante AFM.
