Estudio de la incidencia de mutaciones en el gen DNMT3A en las neoplasias mieloproliferativas crónicas y su asociación con los marcadores moleculares CALR, MPL y JAK2

Abstract

NMPCs are disorders characterized by uncontrolled proliferation and overproduction of one or more of the myeloid cell lines, the origin of which is related to genetic mutations and chromosomal alterations that contribute to their development. The JAK2 V617F mutation, together with the mutations in the CALR and MPL genes, constitute the main prognostic and diagnostic molecular markers of NMPCs. In recent years, the importance of mutations in the DNMT3A gene, (epigenetics), in NMPCs has been shown, since mutations in this gene have been found in the initial stages of appearance and related to the progression and evolution of these neoplasms towards AML. Course objective: To analyze the frequency and types of mutations that occur in the CALR, MPL and DNMT3A genes for NMPC and AML cases in a sample from the Mexican population. Materials and methods: By means of informed consent, peripheral blood and / or bone marrow samples were collected with a diagnosis of NMPC and AML, DNA was extracted using a kit, and samples were classified based on the presence of the mutation JAK2 V617K and endpoint PCR and allele-specific PCR were performed, followed by agarose gel electrophoresis and finally they were sequenced by the Sanger method and the electropherograms were analyzed. Results: A total of 49 samples were collected, (35 JAK2 V617F -, 11 JAK2 V617F + and 3 presumptive AML), of these only the JAK2 V617F- group was positive for the CALR and MPL mutations, with 7 and 2 samples positive respectively. In the case of DNMT3A, the selected samples were all negative for R882 mutations and only one synonymous mutation was found that was not reported in the literature.

Las NMPC son trastornos que se caracterizan por una proliferación y sobreproducción descontrolada de una o más de las líneas celulares mieloides, cuyo origen está relacionado con mutaciones genéticas y alteraciones cromosómicas que contribuyen a su desarrollo. La mutación JAK2 V617F, junto con las mutaciones en los genes CALR y MPL, constituyen los principales marcadores moleculares pronósticos y diagnósticos de las NMPC. En los últimos años se ha puesto de manifiesto la importancia de las mutaciones en el gen DNMT3A, (epigenética), en las NMPC, dado que mutaciones en este gen se han encontrado en los estadios iniciales de aparición y relacionado en la progresión y evolución de estas neoplasias hacia LMA. Objetivo general: Analizar la frecuencia y los tipos de mutaciones que se presentan en los genes CALR, MPL y DNMT3A para los casos de NMPC y LMA en una muestra de la población mexicana. Materiales y métodos: Mediante el consentimiento informado se realizó la recolección de muestras de sangre periférica y/o medula ósea con diagnóstico de NMPC y LMA, se extrajo el DNA por medio de kit, se clasificaron las muestras con base en la presencia de la mutación JAK2 V617K y se les realizó PCR punto final y PCR alelo específica, seguido de electroforesis en gel de agarosa y finalmente se secuenciaron por el método de Sanger y se analizaron los electroferogramas. Resultados: Se recopilaron un total de 49 muestras, (35 JAK2 V617F -, 11 JAK2 V617F + y 3 presuntivas de LMA), de estas solo el grupo JAK2 V617F – resulto positivo a las mutaciones de CALR y MPL, con 7 y 2 muestras positivas respectivamente. Para el caso de DNMT3A las muestras seleccionadas resultaron todas negativas a las mutaciones R882 y solo se encontró una mutación sinónima no reportada en la literatura.