Diagnóstico de brucelosis caprina por PCR

Abstract

Brucellosis is a zoonosis caused by microorganisms of the genus Brucella, produces epizootic abortion in domestic animals and a septicemic febrile illness or infections focused on the human. In Mexico, economic losses are estimated at more than $ 2,000 million a year. Therefore, the present work describes the design of a technique of molecular diagnosis of brucellosis in goats using the Polymerase Chain Reaction (PCR) method, which is compatible with the method of sample collection used by the Producers Subcommittee of Ovicaprinos of the State of Michoacán (SPOEM). Two oligonucleotides (omp28f1 / omp28r3) were designed that had a detection threshold of up to 20 pg of Brucella DNA extracted from blood serum samples. The results obtained show a significant decrease in the number of false positives when compared with the Bengal Rose test. It was shown that the present development has a sensitivity of 100% and a specificity of 97%, when contrasting the diagnosis against a definitive test (Complement Fixation Test [PFC], according to NOM-41-ZOO-1995), while the PRB obtained 75%. Type X2 statistical analysis of the analyzed samples found that the results obtained by PRB are significantly different from those obtained by PFC, while the comparison of results by PCR against PFC showed no significant difference. This means that the use of PCR as a screening or screening test in the diagnosis of brucellosis will reduce the number of false positives and the inconvenience it causes.

La brucelosis es una zoonosis causada por microorganismos del género Brucella, produce aborto epizoótico en animales domésticos y una enfermedad febril septicémica o infecciones focalizadas en el humano. En México las pérdidas económicas se estiman en más de $ 2,000 millones al año. Por tanto, el presente trabajo describe el diseño de una técnica de diagnóstico molecular de brucelosis en cabras empleando el método de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), misma que es compatible con el método de recolección de muestras empleado por el Subcomité de Productores de Ovicaprinos del Estado de Michoacán (SPOEM). Se diseñaron dos oligonucleótidos (omp28f1/omp28r3) que presentaron un umbral de detección de hasta 20 pg de ADN de Brucella extraído de muestras de suero sanguíneo. Los resultados obtenidos muestran una sensible disminución en el número de falsos positivos al compararla con la prueba Rosa de Bengala. Se demostró que el presente desarrollo tiene una sensibilidad del 100% y una especificidad del 97 %, al contrastar el diagnóstico contra una prueba definitiva (Prueba de Fijación de Complemento [PFC], según la NOM-41-ZOO-1995), mientras que la PRB obtuvo un 75%. El análisis estadístico tipo X2 de las muestras analizadas encontró que los resultados obtenidos por PRB son significativamente diferentes a los obtenidos por PFC, mientras que la comparación de los resultados por PCR contra PFC no mostraron diferencia significativa. Esto supone que el empleo de PCR como prueba tamiz o de escrutinio en el diagnóstico de brucelosis, disminuirá el número de falsos positivos y los inconvenientes que provoca.