Plasmid pUM505 was isolated from a clinical strain of Pseudomonas aeruginosa and has a size of 123 kilobases (kb), has a pathogenicity island (PAI) with 78 genes, of which 64 have been found in the PAIs PAPI-1 and PAPI 2 from P. aeruginosa PA14, a clinical isolate more virulent than the reference strain P. aeruginosa PAO1. However, it has not been determined whether pUM505 is able to increase the virulence of P. aeruginosa. Furthermore, it is known that the system "Quorum-sensing" regulates various processes based on the cell density, one of the processes covered by this system is the virulence; there are studies in which the mutated genes encoding the synthases LasI and RhlI of PAO1, it decreases their virulence. The aim of this study was to determine whether pUM505 increases the virulence of PAO1 and identify the genes responsible for this phenotype. Using the model of virulence of lettuce leaves was determined that the plasmid increases the virulence of PAO1. Subsequently a gene library of plasmid pUM505 was generated, 120 clones were generated in Escherichia coli, 15 of these showed a virulent phenotype. Then the recombinant plasmids were transferred to PAO1, which found that recombinant plasmids PEH 8, 24, 26 and 28 increased virulence in both bacterial species. The transfer of these plasmids into the lasI and lasI/rhlI mutants of P. aeruginosa don`t increased the virulence, suggesting that the cloned genes in these plasmids are regulated by the system of "Quorum-sensing". The sequence of the cloned fragments in these recombinant plasmids was obtained, identifying the orfs 2, 17, 26, 94 and 111 from pUM505 as previously homologousto genes related to virulence.
El plásmido pUM505 fue aislado de una cepa clínica de Pseudomonas aeruginosa y tiene un tamaño de 123 kilobases (kb), posee una isla de patogenicidad (PAI) con 78 genes, de los cuales 64 han sido encontrados en las PAIs PAPI-1 y PAPI-2 de P. aeruginosa PA14, un aislado clínico más virulento que la cepa de referencia P. aeruginosa PAO1. Sin embargo, no se ha determinado si pUM505 es capaz de incrementar la virulencia de P. aeruginosa. Además, se sabe que el sistema de “Quorum-sensing” regula varios procesos con base en la densidad celular, uno de los procesos regulados por este sistema es el de virulencia; existen estudios en donde al mutar los genes que codifican a las sintasas LasI y RhlI de PAO1, ésta disminuye su virulencia. El objetivo del presente trabajo fue determinar si pUM505 incrementa la virulencia de PAO1 e identificar los genes responsables de conferir dicho fenotipo. Empleando el modelo de virulencia de hojas de lechuga se determinó que el plásmido incrementa la virulencia de PAO1. Posteriormente se generó una biblioteca de genes del plásmido pUM505 de 120 clonas en Escherichia coli, 15 de éstas mostraron un fenotipo virulento. Posteriormente los plásmidos recombinantes se transfirieron a PAO1, donde se encontró que los plásmidos recombinantes pEH 8, 24, 26 y 28 incrementaron la virulencia en ambas especies bacterianas. La transferencia de estos plásmidos en las mutantes lasI y lasI/rhlI de P. aeruginosa no incrementó la virulencia, sugiriendo que los genes clonados en dichos plásmidos son regulados por el sistema de “Quorum-sensing”. Se obtuvo la secuencia de los fragmentos clonados en dichos plásmidos recombinantes, identificando a los orfs 2, 17, 26, 94 y 111 de pUM505, como homólogos a genes previamente relacionados con virulencia.
